| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一章 苯胺及其衍生物的代谢调控研究进展 | 第11-33页 |
| ·苯胺降解微生物的研究进展 | 第11-13页 |
| ·苯胺特性 | 第11页 |
| ·苯胺微生物降解的特点 | 第11-12页 |
| ·苯胺降解细菌资源的研究进展 | 第12-13页 |
| ·苯胺代谢途径的研究进展 | 第13-15页 |
| ·苯胺代谢基因簇及其编码关键酶的研究进展 | 第15-20页 |
| ·苯胺双加氧酶基因的研究进展 | 第15-16页 |
| ·邻苯二酚双加氧酶基因及其遗传调控的研究进展 | 第16-18页 |
| ·苯胺代谢途径基因簇克隆的研究进展 | 第18-20页 |
| ·LysR-type调控蛋白对苯胺代谢途径的调控 | 第20-25页 |
| ·LysR-type调控蛋白在芳烃化合物代谢中的关键作用 | 第20-22页 |
| ·LysR-type调控蛋白的结构和构象 | 第22-23页 |
| ·LysR-type调控蛋白的激活机制 | 第23-25页 |
| ·转座子控制的苯胺代谢基因簇的平行转移的研究进展 | 第25-30页 |
| ·芳烃化合物分解代谢转座子的研究 | 第26-27页 |
| ·IS1071控制的苯胺代谢基因簇的平行转移 | 第27-28页 |
| ·生态岛介导的芳香族化合物代谢基因簇的平行转移 | 第28-30页 |
| ·苯胺代谢表达调控研究的新技术和新方法 | 第30-31页 |
| ·苯胺降解代谢工程的应用 | 第30-31页 |
| ·利用蛋白组学技术研究苯胺代谢 | 第31页 |
| ·论文的目的意义 | 第31-33页 |
| 第二章 苯胺高效降解菌的分离和鉴定 | 第33-63页 |
| ·材料与方法 | 第33-48页 |
| ·实验菌株来源 | 第33页 |
| ·菌株和质粒 | 第33-34页 |
| ·培养基 | 第34页 |
| ·生物化学试剂 | 第34页 |
| ·酶 | 第34页 |
| ·主要仪器 | 第34-35页 |
| ·样品的富集培养和菌株的分离纯化及其驯化 | 第35页 |
| ·电镜观察 | 第35页 |
| ·苯胺的测定采用偶氮比色法 | 第35-36页 |
| ·表型鉴定 | 第36页 |
| ·16S rDNA的克隆和序列分析 | 第36-39页 |
| ·G+C含量和DNA-DNA杂交 | 第39-41页 |
| ·苯胺双加氧酶结构基因tdnQ和转座酶基因的PCR扩增 | 第41-42页 |
| ·Southern杂交 | 第42-46页 |
| ·脉冲场凝胶电泳 | 第46-48页 |
| ·结果与分析 | 第48-61页 |
| ·苯胺降解菌的分离纯化 | 第48页 |
| ·不同苯胺浓度下菌株的电镜切片观察 | 第48页 |
| ·AD9菌耐受苯胺的浓度范围 | 第48-49页 |
| ·AD9菌在最适浓度下的生长及降解性能测定 | 第49页 |
| ·AD9菌生长和降解苯胺的最佳条件 | 第49-50页 |
| ·AD9菌抗生素抗性的鉴定 | 第50页 |
| ·重金属离子对AD9菌降解苯胺的影响 | 第50页 |
| ·AD9菌的表型鉴定 | 第50-51页 |
| ·AD9菌的分子鉴定 | 第51-55页 |
| ·苯胺双加氧酶基因和转座酶基因的克隆与序列分析 | 第55-56页 |
| ·苯胺双加氧酶基因384bp核苷酸序列的系谱分析 | 第56-58页 |
| ·苯胺降解菌中转座酶核苷酸序列PCR结果 | 第58-59页 |
| ·Southern杂交验证苯胺双加氧酶基因的拷贝数 | 第59页 |
| ·AD9菌的苯胺双加氧酶基因的染色体定位 | 第59-61页 |
| ·讨论 | 第61-63页 |
| ·一株新苯胺高效降解菌的分离和鉴定 | 第61页 |
| ·污染环境中苯胺降解基因的平行转移 | 第61-62页 |
| ·AD9菌染色体编码的苯胺间位降解基因簇的发现 | 第62-63页 |
| 第三章 苯胺代谢基因簇的功能筛选和序列分析 | 第63-76页 |
| ·材料和方法 | 第63-66页 |
| ·菌株和质粒 | 第63页 |
| ·酶和试剂 | 第63页 |
| ·培养基 | 第63页 |
| ·Delftia tsuruhatensis AD9 DNA插入片段的制备 | 第63-64页 |
| ·插入片段和载体pUC19的连接 | 第64页 |
| ·连接产物的转化 | 第64-65页 |
| ·苯胺代谢基因阳性克隆的筛选 | 第65页 |
| ·限制性内切酶对目的重组子质粒的酶切验证 | 第65-66页 |
| ·结果 | 第66-72页 |
| ·基因组DNA部分酶切片段的制备 | 第66页 |
| ·回收9-21kb之间的部分酶切产物与载体pUC19连接 | 第66-67页 |
| ·苯胺代谢基因簇阳性克隆的功能筛选 | 第67-68页 |
| ·24.7Kb片段的核苷酸及推导的氨基酸序列分析 | 第68-71页 |
| ·染色体编码的tad基因簇和质粒编码的tdn基因簇的对比 | 第71-72页 |
| ·AD9的AD和C23Os与其它同源蛋白系统发育的关系 | 第72页 |
| ·讨论 | 第72-76页 |
| ·简便快速的苯胺降解基因簇功能筛选方法 | 第72-75页 |
| ·染色体编码完整苯胺间位裂解途径酶系的基因簇的克隆 | 第75页 |
| ·质粒和染色体上相同降解转座子的发现 | 第75-76页 |
| 第四章 苯胺代谢关键酶的功能鉴定和表达调控的研究 | 第76-96页 |
| ·材料和方法 | 第76-83页 |
| ·菌株和质粒 | 第76-77页 |
| ·酶和试剂盒 | 第77页 |
| ·培养基 | 第77页 |
| ·Clark电极测定苯胺双加氧酶酶活 | 第77页 |
| ·代谢产物的测定 | 第77-78页 |
| ·邻苯二酚双加氧酶的测定 | 第78页 |
| ·pET28a表达载体的构建 | 第78-80页 |
| ·SDS-PAGE蛋白电泳 | 第80-81页 |
| ·苯胺双加氧酶基因簇在AD9和醋酸钙不动杆菌PHEA-2中的表达 | 第81-83页 |
| ·结果 | 第83-92页 |
| ·苯胺代谢关键酶的功能验证 | 第83-85页 |
| ·tadC1和tadC2的蛋白表达SDS-PAGE分析及对不同底物酶活测定 | 第85-87页 |
| ·苯胺双加氧酶基因在AD9和A.calcoaceticus PHEA-2中的表达 | 第87-90页 |
| ·AD9中的苯胺代谢调控的初步研究 | 第90-92页 |
| ·讨论 | 第92-96页 |
| ·AD9苯胺代谢途径的特点及其邻苯二酚双加氧酶在代谢途径中的作用 | 第92-93页 |
| ·AD9苯胺代谢途径基因簇的异源表达特点 | 第93-94页 |
| ·AD9中苯胺代谢调控研究的初步结论及需解决的问题 | 第94-96页 |
| 参考文献 | 第96-112页 |
| 附录 | 第112-126页 |
| 致谢 | 第126-127页 |
| 个人简历 | 第127页 |
