| 引言 | 第1-13页 |
| 第一章 双夹心ELISA方法检测EDS-76病毒的研究 | 第13-29页 |
| 1 材料 | 第13-16页 |
| ·主要试剂 | 第13页 |
| ·病毒和抗体 | 第13页 |
| ·材料与仪器 | 第13-14页 |
| ·主要溶液配制 | 第14-16页 |
| ·辛酸-硫酸铵盐析法提纯IgG用溶液的配制 | 第14页 |
| ·双夹心ELISA所用试剂 | 第14-15页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳主要试剂 | 第15-16页 |
| 2 方法 | 第16-21页 |
| ·病毒增殖和纯化 | 第16页 |
| ·高免血清的制备 | 第16-17页 |
| ·鸡抗EDS-76病毒抗体制备 | 第16页 |
| ·兔抗EDS-76病毒抗体制备 | 第16页 |
| ·羊抗兔抗体制备 | 第16-17页 |
| ·试验鸡人工感染EDS-76病毒 | 第17页 |
| ·血清纯化和分析 | 第17-18页 |
| ·辛酸-硫酸铵法纯化血清IgG | 第17页 |
| ·血清纯度分析 | 第17-18页 |
| ·双夹心ELISA方法的建立 | 第18-19页 |
| ·方阵法确定最佳工作条件 | 第18页 |
| ·方阵滴定法测定包被抗体和病毒抗原的最佳工作浓度 | 第18-19页 |
| ·方阵滴定法测定兔抗EDS-76病毒抗体和酶标羊抗兔抗体的最佳工作浓度 | 第19页 |
| ·双夹心ELISA方法的操作程序 | 第19页 |
| ·特异性试验 | 第19页 |
| ·交叉试验 | 第19页 |
| ·阻断试验 | 第19页 |
| ·敏感性试验 | 第19-20页 |
| ·人工感染鸡带毒、排毒试验 | 第20页 |
| ·临床样本检测 | 第20-21页 |
| 3 结果与分析 | 第21-27页 |
| ·病毒及抗体指标 | 第21页 |
| ·EDS-76病毒免疫电镜 | 第21页 |
| ·纯化抗体聚丙烯酰胺凝胶电泳结果 | 第21-22页 |
| ·最佳反应条件的确定 | 第22-23页 |
| ·最佳反应条件选择结果 | 第22页 |
| ·包被抗体和抗原最佳工作浓度试验结果 | 第22-23页 |
| ·兔抗EDS-76病毒抗体和酶标羊抗兔抗体的最佳工作浓度 | 第23页 |
| ·双夹心ELISA特异性试验结果 | 第23-24页 |
| ·交叉试验结果 | 第23-24页 |
| ·阻断试验结果 | 第24页 |
| ·敏感性试验结果 | 第24-25页 |
| ·人工感染鸡组织脏器带毒检测 | 第25-26页 |
| ·人工感染鸡排毒持续期检测 | 第26页 |
| ·临床样本检测 | 第26-27页 |
| 4 讨论 | 第27-29页 |
| 第二章 胶体金试纸条检测EDS-76病毒的研究 | 第29-42页 |
| 1 材料 | 第29-31页 |
| ·主要试剂与试验材料 | 第29页 |
| ·主要仪器设备 | 第29-30页 |
| ·主要溶液的配制 | 第30-31页 |
| 2 方法 | 第31-35页 |
| ·胶体金颗粒的制备 | 第31页 |
| ·制备前器皿的清洁和硅化 | 第31页 |
| ·柠檬酸三钠还原法制备胶体金 | 第31页 |
| ·胶体金颗粒的质量鉴定及直径测定 | 第31页 |
| ·胶体金标记抗体制备 | 第31-32页 |
| ·抗体标记前的处理 | 第31-32页 |
| ·抗体最低稳定量选择 | 第32页 |
| ·抗体的标记 | 第32页 |
| ·胶体金颗粒的选择 | 第32页 |
| ·胶体金标记抗体浓度的确定 | 第32页 |
| ·胶体金标记抗体吸附于玻璃纤维 | 第32-33页 |
| ·胶体金标记抗体稳定剂的选择 | 第33页 |
| ·胶体金免疫电镜 | 第33页 |
| ·胶体金试纸条的装配 | 第33页 |
| ·胶体金试纸条的检测方法和结果判断 | 第33-34页 |
| ·胶体金试纸条的性能测定试验 | 第34页 |
| ·特异性试验 | 第34页 |
| ·灵敏度试验 | 第34页 |
| ·稳定性试验 | 第34页 |
| ·临床样本检测 | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-40页 |
| ·胶体金制备 | 第35-37页 |
| ·不同粒径的胶体金溶液呈现的颜色 | 第35页 |
| ·胶体金质量 | 第35-37页 |
| ·抗体最低稳定量的选择 | 第37页 |
| ·胶体金颗粒的选择和胶体金标记抗体浓度的确定 | 第37页 |
| ·胶体金标记抗体稳定剂的选择 | 第37页 |
| ·胶体金试纸条检测样品的结果显示 | 第37-38页 |
| ·特异性试验 | 第38-39页 |
| ·交叉试验 | 第38-39页 |
| ·阻断试验 | 第39页 |
| ·胶体金免疫电镜 | 第39页 |
| ·稳定性试验 | 第39页 |
| ·临床样本检测 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 PCR方法检测EDS-76病毒的研究 | 第42-55页 |
| 1 材料 | 第42-44页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| ·主要仪器 | 第42页 |
| ·试剂配制 | 第42-43页 |
| ·PCR引物 | 第43-44页 |
| 2 方法 | 第44-48页 |
| ·病毒DNA提取 | 第44-45页 |
| ·病毒DNA提取的简单流程 | 第44页 |
| ·具体操作程序 | 第44-45页 |
| ·病毒DNA的快速提取 | 第45-46页 |
| ·缓冲液及溶液 | 第45页 |
| ·样品准备： | 第45页 |
| ·具体操作程序 | 第45-46页 |
| ·DNA浓度测定及残存蛋白质和RNA的检测 | 第46页 |
| ·浓度测定 | 第46页 |
| ·纯度测定 | 第46页 |
| ·DNA分子检测 | 第46页 |
| ·PCR最优条件选择 | 第46页 |
| ·PCR产物的检验 | 第46-47页 |
| ·PCR敏感性试验 | 第47页 |
| ·EDS病毒DNA和病毒尿囊液直接加热煮沸的PCR结果比较 | 第47页 |
| ·特异性试验 | 第47页 |
| ·试验感染鸡组织和血液带毒检测 | 第47页 |
| ·试验感染鸡组织和血液排毒检测 | 第47页 |
| ·临床样本检测 | 第47-48页 |
| 3 结果与分析 | 第48-53页 |
| ·PCR反应最适条件的确定： | 第48页 |
| ·病毒DNA检测 | 第48页 |
| ·PCR敏感性检验 | 第48-49页 |
| ·EDS病毒DNA和病毒尿囊液直接加热煮沸PCR的结果比较 | 第49页 |
| ·特异性检测结果 | 第49-50页 |
| ·人工试验鸡组织和血液中病毒的检测 | 第50-51页 |
| ·人工感染鸡排毒检测 | 第51页 |
| ·临床样本PCR检测结果 | 第51-52页 |
| ·四种检测方法比较 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第60-61页 |
| 作者简历 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
