| 1 引言 | 第1-14页 |
| 2 材料与方法 | 第14-24页 |
| ·材料及溶液配制 | 第14-18页 |
| ·标准毒及标准阳性血清 | 第14页 |
| ·MDBK细胞 | 第14页 |
| ·实验动物 | 第14页 |
| ·病料来源 | 第14页 |
| ·细胞培养所需主要试剂 | 第14页 |
| ·抗体制备和免疫球蛋白IgG提取所需主要试剂 | 第14页 |
| ·酶标抗体的制备及双抗体夹心ELISA所需的主要试剂 | 第14-15页 |
| ·RT-PCR所需的主要化学试剂 | 第15页 |
| ·RT-PCR所需的主要生物学试剂 | 第15页 |
| ·所需主要仪器 | 第15-16页 |
| ·分析软件 | 第16页 |
| ·主要溶液的配制 | 第16-18页 |
| ·双抗体夹心ELISA诊断方法的建立 | 第18-21页 |
| ·细胞培养及病毒的增殖 | 第18页 |
| ·BVDV的浓缩和纯化 | 第18页 |
| ·兔抗BVDV高免血清的制备 | 第18-19页 |
| ·高免血清效价的测定 | 第19页 |
| ·免疫球蛋白IgG的提取及纯度鉴定 | 第19页 |
| ·酶标抗体的制备 | 第19-20页 |
| ·双抗体夹心ELISA试验条件的选择 | 第20页 |
| ·双抗体夹心ELISA试验的操作程序 | 第20-21页 |
| ·双抗体夹心ELISA的特异性试验 | 第21页 |
| ·双抗体夹心ELISA对河北省不同地区奶牛感染BVDV的流行病学调查 | 第21页 |
| ·RT-PCR检测BVDV抗原方法的建立 | 第21-23页 |
| ·BVDV病毒的增殖 | 第21页 |
| ·BVDV Oregon C_(24)V病毒液TCID_(50)的测定 | 第21-22页 |
| ·引物的设计与合成 | 第22页 |
| ·病毒RNA的提取 | 第22页 |
| ·反转录合成cDNA | 第22页 |
| ·PCR扩增反应 | 第22-23页 |
| ·扩增产物的检测及酶切鉴定 | 第23页 |
| ·PCR特异性试验 | 第23页 |
| ·PCR灵敏性试验 | 第23页 |
| ·PCR重复性试验 | 第23页 |
| ·BVDV不同毒株E2基因的变异分析 | 第23-24页 |
| ·BVDV不同毒株E2基因核苷酸序列同源性分析 | 第23页 |
| ·BVDV不同毒株E2基因氨基酸序列分析 | 第23页 |
| ·BVDV不同毒株系统发育树的构建 | 第23-24页 |
| 3 结果 | 第24-35页 |
| ·双抗体夹心ELISA检测方法的建立 | 第24-28页 |
| ·细胞培养及病毒的增殖结果 | 第24-25页 |
| ·高免血清效价的测定结果 | 第25页 |
| ·免疫球蛋白IgG的提取及纯度鉴定结果 | 第25-26页 |
| ·酶标抗体的制备结果 | 第26页 |
| ·双抗体夹心ELISA试验条件的选择结果 | 第26-28页 |
| ·双抗体夹心ELISA的初步应用结果 | 第28-29页 |
| ·RT-PCR检测BVDV抗原方法的建立 | 第29-32页 |
| ·BVDV Oregon C_(24)V病毒液TCID_(50)的测定结果 | 第29页 |
| ·RT-PCR扩增结果 | 第29-30页 |
| ·RT-PCR特异性试验结果 | 第30-31页 |
| ·RT-PCR的酶切鉴定结果 | 第31页 |
| ·RT-PCR敏感性试验结果 | 第31-32页 |
| ·RT-PCR重复性试验结果 | 第32页 |
| ·BVDV不同毒株E2基因的序列差异分析 | 第32-35页 |
| ·核苷酸序列同源性分析结果 | 第32页 |
| ·BVDV不同毒株氨基酸序列分析结果 | 第32-34页 |
| ·BVDV不同毒株系统发育树的构建结果 | 第34-35页 |
| 4 讨论 | 第35-39页 |
| 5 结论 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-45页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第45-46页 |
| 作者简历 | 第46-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 附录 | 第48-51页 |
| 牛病毒性腹泻致病机理及实验室诊断的研究 | 第50-51页 |
