| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 1 绪论 | 第9-17页 |
| ·干旱胁迫对植物的影响 | 第9-11页 |
| ·干旱胁迫对植物生长发育的影响 | 第9页 |
| ·干旱胁迫对植物细胞结构的影响 | 第9-10页 |
| ·干旱胁迫对植物生理过程的影响 | 第10-11页 |
| ·植物晚期胚胎富集蛋白研究进展 | 第11-16页 |
| ·LEA蛋白的存在和性质 | 第12页 |
| ·LEA蛋白的分类 | 第12-13页 |
| ·LEA蛋白的结构与功能 | 第13-14页 |
| ·LEA基因的表达调控 | 第14-15页 |
| ·利用转基因植物评价LEA基因功能 | 第15-16页 |
| ·本项研究的目的和意义 | 第16-17页 |
| 2 LEA基因植物表达载体的构建 | 第17-21页 |
| ·实验材料 | 第17页 |
| ·菌株和质粒 | 第17页 |
| ·酶和试剂 | 第17页 |
| ·实验方法 | 第17-18页 |
| ·LEA基因植物表达载体的构建 | 第17-18页 |
| ·中间表达载体导入农杆菌EHA105 | 第18页 |
| ·结果与分析 | 第18-21页 |
| ·目的基因的扩增及扩增产物的双酶切 | 第18-19页 |
| ·pROKⅡ的双酶切 | 第19页 |
| ·中间表达载体pLR的鉴定 | 第19-20页 |
| ·三亲交配转化质粒的PCR扩增 | 第20-21页 |
| 3 根癌农杆菌介导的烟草的遗传转化 | 第21-28页 |
| ·实验材料 | 第21页 |
| ·植物材料 | 第21页 |
| ·培养基 | 第21页 |
| ·主要生化试剂 | 第21页 |
| ·实验方法 | 第21-24页 |
| ·无菌苗的继代培养 | 第21页 |
| ·抗生素浓度的确定 | 第21-22页 |
| ·根癌农杆菌介导的烟草的遗传转化 | 第22-24页 |
| ·结果与分听 | 第24-28页 |
| ·选择抗生素浓度的确定 | 第24-25页 |
| ·抑菌抗生素最佳浓度的确定 | 第25-27页 |
| ·LEA基因的高效遗传转化体系 | 第27-28页 |
| 4 转基因烟草的分子检测 | 第28-39页 |
| ·主要试剂 | 第28-29页 |
| ·DNA提取试剂 | 第28页 |
| ·杂交检测试剂 | 第28-29页 |
| ·总RNA提取试剂 | 第29页 |
| ·酶类及试剂盒 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-34页 |
| ·转化烟草的PCR检测 | 第29-30页 |
| ·探针的制备 | 第30-31页 |
| ·Southern印迹杂交 | 第31-32页 |
| ·RT-PCR检测 | 第32-33页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR检测 | 第33-34页 |
| ·结果与分析 | 第34-39页 |
| ·转化烟草的PCR检测 | 第34页 |
| ·转化烟草的Southern印迹杂交 | 第34-35页 |
| ·转基因烟草总RNA的提取和纯化 | 第35页 |
| ·高质量cDNA的获得 | 第35页 |
| ·RT-PCR检测 | 第35-36页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR检测 | 第36-39页 |
| 5 LEA基因的功能验证 | 第39-50页 |
| ·实验材料 | 第39页 |
| ·植物材料 | 第39页 |
| ·试剂 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-42页 |
| ·超氧化物歧化酶(SOD)活性测定 | 第39-40页 |
| ·过氧化物酶(POD)活性测定 | 第40页 |
| ·丙三醛(MDA)含量测定 | 第40-41页 |
| ·相对电导率测定 | 第41页 |
| ·苗高和旱害指数的比较 | 第41页 |
| ·抗旱能力与外源基因表达量的相关性分析 | 第41-42页 |
| ·结果与分析 | 第42-50页 |
| ·转LEA基因烟草SOD活性比较 | 第42页 |
| ·转LEA基因烟草POD活性比较 | 第42-43页 |
| ·转LEA基因烟草MDA含量的比较 | 第43-45页 |
| ·转LEA基因烟草质膜相对透性比较 | 第45-46页 |
| ·转LEA基因烟草相对生长量比较 | 第46-47页 |
| ·转LEA基因烟草旱害情况比较 | 第47-48页 |
| ·转LEA基因烟草的抗旱能力与外源基因表达量的相关性分析 | 第48-50页 |
| 6 讨论 | 第50-56页 |
| ·转LEA基因烟草的检测 | 第50页 |
| ·PEG模拟干旱胁迫研究转基因烟草生理的可行性 | 第50-51页 |
| ·水分胁迫对抗氧化系统的影响 | 第51-52页 |
| ·水分胁迫对脂质过氧化作用的影响 | 第52-53页 |
| ·水分胁迫对质膜相对透性的影响 | 第53页 |
| ·转LEA基因烟草中存在转录后基因沉默的可能性分析 | 第53-55页 |
| ·LEA基因功能评价 | 第55页 |
| ·问题和展望 | 第55-56页 |
| 7 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 附录 LEA基因植物表达载体的构建流程 | 第64-65页 |
| 图版 | 第65-66页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |