| 第一章 前言 | 第1-18页 |
| 1.SARS 病原体的确证 | 第9-11页 |
| 2. 冠状病毒家族 | 第11-13页 |
| 3.SARS 的分子生物学 | 第13-15页 |
| 4.SARS 核衣壳蛋白(N 蛋白)特性 | 第15-18页 |
| 第二章 材料 | 第18-21页 |
| 第三章 方法 | 第21-38页 |
| 1. 重组质粒PET28A-CHAP10-N 的构建 | 第21-27页 |
| ·目的基因SARS-N 基因的获得 | 第21页 |
| ·重组表达载体pET28a-chap10 的构建 | 第21-25页 |
| ·重组质粒pET28a-chap10-N 的构建 | 第25-27页 |
| 2. 重组蛋白的表达 | 第27-28页 |
| ·表达质粒转入BL21(DE3)受体菌 | 第27页 |
| ·IPTG 诱导重组蛋白表达 | 第27-28页 |
| 3. 重组蛋白的蛋白印迹(WESTERN BLOT)分析 | 第28-29页 |
| 4. 重组蛋白大规模发酵培养 | 第29-31页 |
| 5. 重组蛋白的分离纯化 | 第31-33页 |
| ·菌体的裂解 | 第31页 |
| ·DEAE Sepharose FF 阴离子交换层析 | 第31-32页 |
| ·SP Sepharose FF 强阳离子交换层析 | 第32页 |
| ·Blue Sepharose CL 68 | 第32-33页 |
| ·蛋白含量的测定(lowery 方法) | 第33页 |
| 6. 纯化重组蛋白的ELISA 检测 | 第33页 |
| 7. 单克隆抗体的制备 | 第33-38页 |
| ·免疫动物 | 第33-34页 |
| ·细胞融合 | 第34-37页 |
| ·单抗株的Western blot 鉴定 | 第37-38页 |
| 第四章 实验结果 | 第38-53页 |
| 1. SARS-N 基因的获得 | 第38-39页 |
| 2. CHAP10 基因的扩增 | 第39-40页 |
| 3. PMD18-T-CHAP10 的酶切鉴定 | 第40-41页 |
| 4. PMD18-T-CHAP10 序列测定 | 第41页 |
| 5. 重组表达载体PET28A-CHAP10 的酶切鉴定 | 第41-43页 |
| 6. 重组质粒PET28A-CHAP10-N 的酶切鉴定结果 | 第43-46页 |
| 7. 重组蛋白的诱导表达 | 第46页 |
| 8. 重组蛋白的WESTERN BLOT 鉴定 | 第46-47页 |
| 9. 重组蛋白大规模发酵培养 | 第47-48页 |
| 10. 重组蛋白的纯化 | 第48-50页 |
| 11. 重组纯化蛋白含量的测定(LOWERY 方法)结果 | 第50-51页 |
| 12. 重组纯化SARS-N 蛋白的ELISA 检测 | 第51页 |
| 13. 单克隆抗体的制备 | 第51-53页 |
| 第五章 讨论 | 第53-62页 |
| 1. 目的蛋白的选择 | 第53-54页 |
| 2. 表达系统的选择 | 第54-55页 |
| 3. 分子伴侣的助表达作用 | 第55-56页 |
| 4. 工程菌发酵条件的优化 | 第56-58页 |
| 5. 纯化条件探讨 | 第58-60页 |
| 6. 重组SARS-N 蛋白的抗原性研究 | 第60页 |
| 7. 单克隆抗体制备 | 第60-62页 |
| 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 摘要 | 第69-81页 |
