| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 符号与缩略语说明 | 第13-14页 |
| 前言 | 第14-15页 |
| 文献综述 | 第15-45页 |
| 第一章 农药污染和生物修复技术 | 第15-32页 |
| 1. 农药的污染 | 第15-17页 |
| 2. 生物修复技术概况 | 第17-18页 |
| 3. 生物修复技术的分类 | 第18-23页 |
| ·原位生物修复技术 | 第19-22页 |
| ·异位生物修复技术 | 第22-23页 |
| 4. 生物修复技术的影响因素 | 第23-26页 |
| ·污染物的生物可利用性(bioavilibility) | 第23页 |
| ·生物活性(bioactivity) | 第23-24页 |
| ·环境因素 | 第24-26页 |
| 5. 微生物降解有毒化合物的方式 | 第26-27页 |
| ·氧化作用 | 第26-27页 |
| ·还原作用 | 第27页 |
| ·水解作用 | 第27页 |
| ·缩合或共轭形式 | 第27页 |
| 6. 典型有机化合物的生物降解 | 第27-32页 |
| ·芳香族有机化合物的降解 | 第27-29页 |
| ·拟除虫菊酯类农药的微生物降解 | 第29-32页 |
| 第二章 生物修复中的分子生物学 | 第32-45页 |
| 1 未培养微生物(unculturable microorganism，UCM)的研究 | 第32-33页 |
| 2 分子生物学方法 | 第33-40页 |
| ·环境微生物群落DNA的提取 | 第33-34页 |
| ·标记核酸探针杂交技术 | 第34页 |
| ·原位荧光杂交技术(fluorescent in situ hybridazation，FISH) | 第34-35页 |
| ·基于PCR技术的研究方法 | 第35-36页 |
| ·微生物基因组中特异DNA片段的序列分析 | 第36-37页 |
| ·DNA扩增片段电泳检测技术 | 第37页 |
| ·宏基因组(metagenome)文库的构建和应用 | 第37-38页 |
| ·生物芯片 | 第38-39页 |
| ·报道基因 | 第39页 |
| ·生物修复中的应用 | 第39-40页 |
| 3. 可移动遗传元件(MGEs)和水平基因转移(HGT) | 第40-45页 |
| 研究报告 | 第45-115页 |
| 第一章 氯氰菊酯降解菌株CDT3的分离和降解特性研究 | 第45-68页 |
| 第一节 氯氰菊酯降解菌的分离、鉴定 | 第45-56页 |
| 1. 材料与方法 | 第45-49页 |
| ·培养基与试剂 | 第45-46页 |
| ·仪器 | 第46页 |
| ·降解菌的分离与鉴定 | 第46-48页 |
| ·CDT3对氰氯菊酯的降解试验 | 第48页 |
| ·CDT3最适生长条件研究 | 第48-49页 |
| ·CDT3的抗生素抗性试验 | 第49页 |
| ·农药检测方法 | 第49页 |
| 2. 结果及讨论 | 第49-56页 |
| ·菌株分离与鉴定 | 第49-51页 |
| ·菌株的系统进化分析 | 第51-52页 |
| ·生长曲线测定 | 第52-53页 |
| ·降解性能的验证 | 第53-54页 |
| ·生长条件的研究 | 第54-56页 |
| 第二节 氯氰菊酯降解菌株CDT3的降解特性 | 第56-62页 |
| 1 材料与方法 | 第56-57页 |
| ·菌株 | 第56页 |
| ·培养基和试剂 | 第56页 |
| ·仪器 | 第56页 |
| ·CDT3降解氯氰菊酯的特性研究 | 第56-57页 |
| ·茶叶降解试验 | 第57页 |
| ·氯氰菊酯残留检测方法 | 第57页 |
| 2 结果与讨论 | 第57-62页 |
| ·降解曲线的测定 | 第57-58页 |
| ·接种量与降解率的关系 | 第58-59页 |
| ·CDT3菌株的共代谢的研究 | 第59页 |
| ·最佳降解条件 | 第59-61页 |
| ·CDT3对氯氰菊酯的耐受性实验 | 第61页 |
| ·茶叶降解试验结果 | 第61-62页 |
| 第三节 CDT3降解氯氰菊酯的途径 | 第62-68页 |
| 1 材料与方法 | 第62-63页 |
| ·材料 | 第62页 |
| ·氯氰菊酯的降解产物和降解途径分析 | 第62-63页 |
| 2 结果与讨论 | 第63-66页 |
| ·降解产的气相色谱检测 | 第63-64页 |
| ·降解产物的GC-MS分析和降解途径推测 | 第64-66页 |
| 3. 讨论 | 第66-68页 |
| 第二章 3-苯氧基苯甲酸(3-PBA)降解菌株PBM11的分离和降解特性研究 | 第68-79页 |
| 1 材料与方法 | 第68-71页 |
| ·培养基和试剂 | 第68页 |
| ·仪器 | 第68-69页 |
| ·菌株的富集与分离 | 第69页 |
| ·菌株的鉴定 | 第69页 |
| ·PBM11 16S rDNA序列的系统进化分析 | 第69页 |
| ·PBM11 对3-PBA的降解试验 | 第69页 |
| ·3-PBA的检测方法 | 第69-70页 |
| ·CDT3和PBM11联合作用对氯氰菊酯的降解 | 第70页 |
| ·环境因素对降解的影响 | 第70页 |
| ·底物利用试验 | 第70页 |
| ·PBM11土壤降解试验 | 第70-71页 |
| ·PBM11质粒的提取 | 第71页 |
| 2 结果与讨论 | 第71-78页 |
| ·菌种分离与鉴定 | 第71-72页 |
| ·PBM11降解性能验证 | 第72-73页 |
| ·CDT3和PBM11联合作用对氯氰菊酯的降解 | 第73-74页 |
| ·环境因素对3-PBA降解的影响 | 第74-76页 |
| ·底物利用谱和降解途径推测 | 第76-77页 |
| ·土壤污染处理试验 | 第77-78页 |
| ·质粒的提取 | 第78页 |
| 3 讨论 | 第78-79页 |
| 第三章 CDT3和PBM11协同作用降解氯氰菊酯研究 | 第79-90页 |
| 第一节 CDT3和PBM11协同降解关系的研究 | 第79-84页 |
| 1 材料与方法 | 第79-80页 |
| ·菌株 | 第79页 |
| ·培养基和试剂 | 第79-80页 |
| ·仪器 | 第80页 |
| ·农药的提取与检测 | 第80页 |
| 2. 结果及讨论 | 第80-83页 |
| ·3-PBA对CDT3的生长的影响 | 第80-81页 |
| ·氯氰菊酯对PBM11的生长的影响 | 第81页 |
| ·加入PBA对CDT3降解氯氰菊酯的影响 | 第81-82页 |
| ·CDT3和PBM11降解氯氰菊酯的最适比例 | 第82页 |
| ·CDT3和PBM11的接种时间对氯氰菊酯降解与菌株生长的影响 | 第82-83页 |
| 3. 讨论 | 第83-84页 |
| 第二节 CDT3和PBM11协同降解土壤中氯氰菊酯及其中间产物3-PBA的研究 | 第84-90页 |
| 1 材料与方法 | 第84-86页 |
| ·供试土壤 | 第84页 |
| ·菌液 | 第84页 |
| ·培养基 | 第84-85页 |
| ·试剂和仪器 | 第85页 |
| ·土壤中协同降解试验方法 | 第85页 |
| ·农药的提取和检测 | 第85页 |
| ·土壤中微生物结构的分析 | 第85页 |
| ·土壤细菌16SrDNA V3区DGGE分析 | 第85-86页 |
| 2. 结果与分析 | 第86-88页 |
| ·土壤中氯氰菊酯和3-PBA的降解试验 | 第86页 |
| ·氯氰菊酯污染和施加降解菌对土壤微生物群落结构的影响 | 第86-88页 |
| 3. 讨论 | 第88-90页 |
| 第四章 CDT3中氯氰菊酯降解酶研究和酯酶基因(cesA)的克隆 | 第90-115页 |
| 第一节 CDT3中降解酶活性研究 | 第90-98页 |
| 1. 材料与方法 | 第90-92页 |
| ·菌种及来源 | 第90页 |
| ·试剂与仪器 | 第90页 |
| ·实验方法 | 第90-92页 |
| 2. 结果及分析 | 第92-97页 |
| ·降解酶液的提取 | 第92页 |
| ·CDT3降解酶的酯酶活性初步分析 | 第92-93页 |
| ·降解酶酶反应体系的建立 | 第93-94页 |
| ·降解酶的定位 | 第94-95页 |
| ·降解酶活性的初步研究 | 第95-97页 |
| 3. 讨论 | 第97-98页 |
| 第二节 CDT3中的酯酶基因(cesA)的克隆和序列分析 | 第98-115页 |
| 1. 材料与方法 | 第98-105页 |
| ·菌株与质粒 | 第98页 |
| ·培养基和试剂 | 第98-99页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第99-100页 |
| ·酶切体系建立 | 第100-101页 |
| ·试剂盒回收酶切片段 | 第101页 |
| ·载体脱磷 | 第101-102页 |
| ·酶连 | 第102-103页 |
| ·转化 | 第103页 |
| ·CDT3基因文库的构建 | 第103页 |
| ·阳性转化子的筛选 | 第103页 |
| ·蛋白质电泳分析 | 第103-104页 |
| ·序列分析方法 | 第104-105页 |
| 2 结果与讨论 | 第105-114页 |
| ·CDT3染色体总DNA的提取及Sau3AI酶切 | 第105-106页 |
| ·染色体文库的建立及文库质量的检验 | 第106-107页 |
| ·阳性克隆的获得 | 第107-108页 |
| ·序列测定 | 第108-109页 |
| ·阳性克隆的ORF分析 | 第109页 |
| ·cesA结构基因分析 | 第109页 |
| ·cesA序列分析 | 第109-113页 |
| ·cesA酯酶的功能验证 | 第113页 |
| ·PRT1转化子的总蛋白分析 | 第113-114页 |
| 3 讨论 | 第114-115页 |
| 全文总结 | 第115-117页 |
| 本论文的创新之处 | 第117-118页 |
| 参考文献 | 第118-133页 |
| 附录Ⅰ 文中所用的试剂及培养基配方 | 第133-136页 |
| 附录Ⅱ 文中核酸序列 | 第136-139页 |
| 攻读博士期间发表及已录用的论文 | 第139-140页 |
| 致谢 | 第140页 |
