| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-9页 |
| 1.文献综述 | 第9-19页 |
| ·木聚糖的结构 | 第9页 |
| ·木聚糖的降解酶系 | 第9-13页 |
| ·木聚糖酶 | 第10-12页 |
| ·乙酰木聚糖酯酶 | 第12-13页 |
| ·基因克隆技术的研究进展 | 第13-16页 |
| ·简并PCR技术 | 第13-14页 |
| ·TAIL-PCR技术 | 第14-15页 |
| ·构建基因组文库 | 第15页 |
| ·RACE技术 | 第15-16页 |
| ·生物信息学概述 | 第16-18页 |
| ·cDNA序列的分析 | 第16-17页 |
| ·蛋白质结构的预测 | 第17-18页 |
| ·本课题立题背景及意义 | 第18-19页 |
| 2.实验流程图 | 第19-20页 |
| 3.白色链霉菌菌种的鉴定及产酶能力的验证 | 第20-30页 |
| ·实验材料 | 第20-22页 |
| ·菌株和质粒 | 第20页 |
| ·引物的合成及核酸序列的测定 | 第20页 |
| ·工具酶、试剂盒及生化试剂 | 第20页 |
| ·仪器 | 第20页 |
| ·培养基 | 第20-21页 |
| ·常用溶液 | 第21-22页 |
| ·白色链霉菌菌种的活化及其形态的观察 | 第22页 |
| ·白色链霉菌的活化培养 | 第22页 |
| ·白色链霉菌的扩大培养 | 第22页 |
| ·白色链霉菌菌落形态的观察 | 第22页 |
| ·白色链霉菌菌株的鉴定 | 第22-25页 |
| ·白色链霉菌基因组总DNA的提取 | 第22-23页 |
| ·S rDNA的PCR扩增 | 第23页 |
| ·切胶回收 | 第23-24页 |
| ·连接反应 | 第24页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第24页 |
| ·转化 | 第24-25页 |
| ·转化阳性重组子的筛选 | 第25页 |
| ·产木聚糖降解酶的能力验证 | 第25页 |
| ·实验结果与分析 | 第25-28页 |
| ·菌种的形态观察 | 第25-26页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第26-27页 |
| ·菌种的鉴定 | 第27-28页 |
| ·产木聚糖降解酶的能力验证 | 第28页 |
| ·本章小结 | 第28-30页 |
| 4.白色链霉菌乙酰木聚糖酯酶基因序列的克隆 | 第30-41页 |
| ·实验材料 | 第30-31页 |
| ·菌株和质粒 | 第30页 |
| ·引物的合成及核酸序列的测定 | 第30页 |
| ·工具酶、试剂盒及生化试剂 | 第30页 |
| ·仪器 | 第30页 |
| ·培养基 | 第30-31页 |
| ·常用溶液 | 第31页 |
| ·白色链霉菌基因组DNA的提取 | 第31-32页 |
| ·乙酰木聚糖酯酶的简并引物的设计 | 第32页 |
| ·简并PCR扩增 | 第32-33页 |
| ·TA克隆与测序 | 第33页 |
| ·TAIL-PCR及目的基因的获得 | 第33-38页 |
| ·TAIL-PCR中引物的设计 | 第33-34页 |
| ·TAIL-PCR扩增 | 第34-36页 |
| ·切胶回收 | 第36-37页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第37页 |
| ·TA克隆 | 第37页 |
| ·转化感受态 | 第37-38页 |
| ·阳性重组子的筛选 | 第38页 |
| ·实验结果与分析 | 第38-39页 |
| ·简并PCR扩增得到部分序列 | 第38页 |
| ·简并PCR产物的TA克隆与测序 | 第38-39页 |
| ·TAIL-PCR及目的基因的获得 | 第39页 |
| ·本章小节 | 第39-41页 |
| 5.乙酰木聚糖酯酶基因序列的生物信息学分析 | 第41-48页 |
| ·实验材料 | 第41页 |
| ·生物信息数据库 | 第41页 |
| ·生物信息分析软件 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-42页 |
| ·序列分析及同源性比较 | 第41页 |
| ·同源建模模板的搜索与分析 | 第41页 |
| ·同源建模 | 第41页 |
| ·模型优化后的合理性评估 | 第41-42页 |
| ·实验结果与分析 | 第42-47页 |
| ·序列分析及同源性比较 | 第42页 |
| ·同源建模模板的搜索与分析 | 第42-43页 |
| ·同源建模 | 第43-44页 |
| ·模型优化后的合理性评估 | 第44-47页 |
| ·本章总结 | 第47-48页 |
| 6.白色链霉菌乙酰木聚糖酯酶的表达及性质分析 | 第48-59页 |
| ·实验材料 | 第48-50页 |
| ·菌株与质粒 | 第48页 |
| ·引物合成 | 第48页 |
| ·试剂盒、工具酶和生化试剂 | 第48页 |
| ·仪器 | 第48-49页 |
| ·培养基 | 第49页 |
| ·常用溶液 | 第49-50页 |
| ·原核表达载体p ET-28 a(+)-AXE的构建 | 第50-52页 |
| ·乙酰木聚糖酯酶基因的克隆 | 第50页 |
| ·酶切和连接 | 第50-52页 |
| ·重组质粒的转化 | 第52页 |
| ·重组酶AXE在大肠杆菌中的表达 | 第52-53页 |
| ·重组酶AXE的分离纯化及性质测定 | 第53-55页 |
| ·重组酶AXE酶的分离纯化 | 第53-54页 |
| ·重组酶AXE酶活的测定 | 第54页 |
| ·重组酶AXE的最适pH及pH稳定性测定 | 第54页 |
| ·重组酶AXE的最适温度及热稳定性测定 | 第54-55页 |
| ·测定不同种类的金属离子及化学试剂对重组酶AXE酶活的影响 | 第55页 |
| ·结果与分析 | 第55-58页 |
| ·重组酶AXE在大肠杆菌中的表达 | 第55页 |
| ·重组酶AXE的纯化 | 第55-56页 |
| ·重组酶AXE酶学性质研究 | 第56-58页 |
| ·本章总结 | 第58-59页 |
| 7.结论 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 个人简介 | 第66-67页 |
| 导师简介 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |