| 图表目录 | 第1-7页 |
| 中文摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 英文略语表 | 第11-13页 |
| 前言 | 第13-16页 |
| 第一部分 人FL在甲醇酵母中表达、纯化、体外活性测定及小鼠抗肿瘤实验 | 第16-61页 |
| 1 实验材料 | 第16-27页 |
| ·实验动物 | 第16页 |
| ·菌株 | 第16页 |
| ·质粒 | 第16-19页 |
| ·工具酶 | 第19-20页 |
| ·主要化学试剂 | 第20页 |
| ·细胞培养试剂和消耗材料 | 第20页 |
| ·其它材料 | 第20-21页 |
| ·主要仪器及设备 | 第21页 |
| ·培养基的配制 | 第21-23页 |
| ·主要溶液配方 | 第23-26页 |
| ·引物 | 第26-27页 |
| 2 实验方法 | 第27-37页 |
| ·表达质粒的构建 | 第27-30页 |
| ·重组蛋白在Pichia pastoris中的表达及纯化 | 第30-35页 |
| ·重组蛋白理化性质测定 | 第35-36页 |
| ·重组蛋白体外活性测定 | 第36页 |
| ·鼠皮下移植EL4淋巴瘤模型的治疗实验 | 第36-37页 |
| 3 实验结果 | 第37-57页 |
| ·人FL基因的获得 | 第37-40页 |
| ·重组表达质粒pPIC9K-hFL的构建 | 第40-45页 |
| ·重组蛋白在Pichia pastoris中的表达及纯化 | 第45-51页 |
| ·hFL理化性质测定 | 第51-54页 |
| ·hFL体外活性测定 | 第54-56页 |
| ·重组蛋白体内抗肿瘤实验 | 第56-57页 |
| 4 讨论 | 第57-61页 |
| ·甲醇酵母高表达转化子的筛选方法 | 第57-58页 |
| ·hFL表达条件优选 | 第58-59页 |
| ·hFL的糖基化 | 第59页 |
| ·hFL活性检测 | 第59-61页 |
| 第二部分 腺病毒介导人FL和人GM-CSF联合基因治疗恶性肿瘤 | 第61-93页 |
| 5 实验材料 | 第61-64页 |
| ·细胞系 | 第61页 |
| ·菌株 | 第61-62页 |
| ·质粒 | 第62-63页 |
| ·其它材料 | 第63页 |
| ·引物 | 第63-64页 |
| 6 实验方法 | 第64-73页 |
| ·重组腺病毒pAd-hFL-hGM-CSF和pAd-GFP的构建 | 第64-71页 |
| ·体内外表达量测定 | 第71页 |
| ·体外活性测定 | 第71-72页 |
| ·重组腺病毒Ad-hFL-hGM-CSF联合基因扩增脾脏树突状细胞 | 第72页 |
| ·重组腺病毒Ad-hFL-hGM-CSF联合基因治疗恶性肿瘤 | 第72-73页 |
| 7 实验结果 | 第73-90页 |
| ·高滴度重组腺病毒Ad-hFL-hGM-CSF和Ad-GFP的制备 | 第73-82页 |
| ·体内外表达量测定 | 第82-83页 |
| ·体外活性测定 | 第83-86页 |
| ·重组腺病毒Ad-hFL-hGM-CSF联合基因扩增脾脏树突状细胞 | 第86-87页 |
| ·重组腺病毒Ad-hFL-hGM-CSF联合基因治疗恶性肿瘤 | 第87-88页 |
| ·肿瘤组织病理切片 | 第88-90页 |
| 8 讨论 | 第90-93页 |
| ·穿梭质粒的改造与构建 | 第90页 |
| ·细菌内同源重组 | 第90-91页 |
| ·重组腺病毒的包装 | 第91-92页 |
| ·重组腺病毒表达hFL和hGM-CSF及体内外活性实验 | 第92-93页 |
| 小结 | 第93-96页 |
| 论文参考文献 | 第96-103页 |
| 综述一：FL在骨髓的造血和免疫功能调控中的作用 | 第103-113页 |
| 综述二：靶向腺病毒载体 | 第113-120页 |
| 综述三：造血干细胞基因治疗研究进展 | 第120-125页 |
| 综述四：真核DNA复制机制的研究进展 | 第125-130页 |
| 博士期间发表论文、综述及专利情况 | 第130-131页 |
| 致谢 | 第131页 |
