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农杆菌介导法转化玉米的研究

中文摘要第1-3页
英文摘要第3-7页
缩略语第7-8页
前言第8-9页
第一章 文献综述第9-21页
 玉米遗传转化研究进展第9-19页
 GM-CSF基因及其研究现状第19-21页
第二章 高效再生体系的建立第21-32页
 1 材料与方法第21-23页
   ·材料第21-22页
     ·植物材料第21页
     ·培养基基本成分第21-22页
   ·方法第22-23页
     ·外植体的获得第22页
     ·幼胚培养环境第22页
     ·不同基因型对外植体再生的影响第22页
     ·不同培养基与激素配比对幼胚再生的影响第22页
     ·预处理对再生的影响第22-23页
     ·幼胚长度对再生的影响第23页
     ·幼胚在果穗上的部位对再生的影响第23页
     ·幼胚放置方式对再生的影响第23页
     ·从胚性愈伤形成到转至分化培养基的天数对再生的影响第23页
     ·黑暗培养对再生的影响第23页
 2 结果与分析第23-32页
   ·基因型对玉米幼胚再生的影响第23-24页
   ·不同培养基与激素配比对幼胚再生的影响第24-27页
   ·预处理对再生的影响第27-28页
   ·幼胚长度对再生的影响第28-29页
   ·幼胚在果穗上的部位对再生的影响第29页
   ·幼胚放置方式对再生的影响第29-30页
   ·从胚性愈伤形成到转至分化培养基的天数对再生的影响第30-31页
   ·黑暗培养对再生的影响第31-32页
第三章 遗传转化体系的建立第32-40页
 1 材料与方法第32-34页
   ·材料第32-33页
     ·植物材料第32页
     ·菌株及载体第32页
       ·菌株、质粒的性质第32页
       ·菌株的保存第32页
     ·细菌培养基第32-33页
   ·方法第33-34页
     ·农杆菌的活化、扩增及菌体收集第33页
     ·Gus基因的组织化学检测第33页
     ·最佳浸染时间的确定第33页
     ·最佳共培养时间的确定第33-34页
     ·最佳农杆菌浸染浓度的确定第34页
     ·浸染培养基中最佳蔗糖浓度值确定第34页
     ·浸染培养基中最佳葡萄糖浓度值确定第34页
     ·幼胚长度对Gus瞬时表达率的影响第34页
     ·浸染液基本培养基的比较第34页
     ·潮霉素选择压的确定第34页
     ·延迟筛选对幼胚转化后再生的影响第34页
 2 结果与分析第34-40页
   ·最佳浸染时间的确定第34-35页
   ·最佳共培养时间的确定第35-36页
   ·最佳农杆菌浸染浓度的确定第36页
   ·浸染培养基中最佳蔗糖浓度值确定第36-37页
   ·浸染培养基中最佳葡萄糖浓度值确定第37页
   ·幼胚长度对Gus瞬时表达率的影响第37-38页
   ·浸染液基本培养基的比较第38页
   ·潮霉素选择压的确定第38-39页
   ·延迟筛选对幼胚转化后再生的影响第39-40页
第四章 转基因植株的获得及检测第40-51页
 1 材料与方法第40-46页
   ·材料第40页
     ·植物材料第40页
     ·转化载体第40页
     ·培养基第40页
       ·菌体活化扩增培养基第40页
       ·转化再生培养基第40页
   ·方法第40-46页
     ·农杆菌活化及扩增第40-41页
     ·浸染第41页
     ·共培养第41页
     ·延迟筛选培养第41页
     ·筛选培养第41页
     ·抗性植株的获得第41页
     ·检测第41-46页
       ·Gus组织化学检测第41页
       ·PCR扩增检测第41-45页
         ·抗性植株DNA提取与纯化第41-43页
         ·阳性质粒的提取第43-44页
         ·PCR扩增第44-45页
         ·电泳检测第45页
       ·PCR-Southern bloting检测第45-46页
         ·探针的标记第45页
         ·电泳转膜第45页
         ·预杂交第45页
         ·杂交第45-46页
         ·洗膜第46页
         ·放射自显影第46页
 2 结果与分析第46-51页
   ·转基因植株的获得第46页
   ·转基因植株的检测第46-51页
     ·Gus基因组织化学检测第46-47页
     ·分子检测第47-51页
       ·B73抗性植株的PCR检测第47-48页
         ·B73抗性植株HPT基因的PCR检测第47页
         ·B73抗性植株GM-CSF基因的PCR检测第47-48页
       ·B73抗性植株GM-CSF基因的PCR-Southen blotting检测第48-49页
       ·B73×A188抗性植株的PCR检测第49-51页
         ·B73×A188抗性植株HPT基因的PCR检测第49页
         ·B73×A188抗性植株GM-CSF基因的PCR检测第49-50页
         ·B73×A188抗性植株GM-CSF基因的PCR-Southen blotting检测第50-51页
讨论第51-55页
参考文献第55-64页
图版第64-67页

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