| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 第一部分 文献综述 | 第11-26页 |
| 第一章 α-淀粉酶及其研究进展 | 第11-21页 |
| ·概述 | 第11-13页 |
| ·淀粉 | 第11-12页 |
| ·淀粉水解酶 | 第12-13页 |
| ·α-淀粉酶研究进展 | 第13-21页 |
| ·概述 | 第13页 |
| ·α-淀粉酶的结构特征 | 第13-15页 |
| ·α-淀粉酶催化机理 | 第15-16页 |
| ·α-淀粉酶产生菌的鉴定 | 第16-18页 |
| ·α-淀粉酶酶活测定 | 第18页 |
| ·α-淀粉酶的生产和应用 | 第18-21页 |
| 第二章 原核生物基因克隆概述 | 第21-26页 |
| ·根据已知序列克隆基因 | 第21-22页 |
| ·聚合酶链式反应 | 第21-22页 |
| ·染色体步移 | 第22页 |
| ·克隆未知序列基因 | 第22-25页 |
| ·质粒构建基因文库 | 第23-24页 |
| ·λ噬菌体构建基因文库 | 第24页 |
| ·黏粒构建基因文库 | 第24-25页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第25-26页 |
| 第二部分 研究论文 | 第26-75页 |
| 第三章 淀粉酶产生菌株的筛选及其α-淀粉酶基因的克隆 | 第26-49页 |
| ·实验材料和仪器 | 第26-27页 |
| ·菌株、质粒和工具酶 | 第26页 |
| ·培养基和溶液 | 第26-27页 |
| ·主要仪器和设备 | 第27页 |
| ·实验方法 | 第27-34页 |
| ·产淀粉水解酶菌株的检测 | 第27-28页 |
| ·活性菌株的分类鉴定 | 第28-31页 |
| ·鸟枪法克隆淀粉酶基因 | 第31-34页 |
| ·结果与分析 | 第34-46页 |
| ·淀粉酶活性菌株的筛选 | 第34-35页 |
| ·提取基因组DNA | 第35-36页 |
| ·基于16S rDNA序列的分类鉴定 | 第36-38页 |
| ·Sau3AI消化基因组DNA片段 | 第38-39页 |
| ·pUC118质粒载体的制备 | 第39-40页 |
| ·淀粉酶活性克隆的筛选 | 第40-41页 |
| ·PCR扩增α-淀粉酶AmyH基因 | 第41-43页 |
| ·AmyH氨基酸序列分析 | 第43-46页 |
| ·讨论 | 第46-49页 |
| 第四章 AmyH原核表达载体构建及其表达和纯化 | 第49-62页 |
| ·实验材料和仪器 | 第49页 |
| ·材料和试剂 | 第49页 |
| ·主要仪器和设备 | 第49页 |
| ·实验方法 | 第49-54页 |
| ·AmyH基因表达载体的构建 | 第49-52页 |
| ·pET-AmyH-sp转化到E.coli BL21(trxB) | 第52页 |
| ·IPTG诱导融合AmyH表达 | 第52页 |
| ·SDS-PAGE蛋白质电泳 | 第52-53页 |
| ·AmyH的纯化与包涵体复性 | 第53-54页 |
| ·结果与分析 | 第54-60页 |
| ·AmyH信号肽分析结果 | 第54-55页 |
| ·AmyH基因的酶切图谱 | 第55页 |
| ·PCR扩增AmyH-sp | 第55-56页 |
| ·pET-AmyH-sp表达质粒构建 | 第56-57页 |
| ·SDS-PAGE检测AmyH表达结果 | 第57-58页 |
| ·AmyH的纯化 | 第58-60页 |
| ·讨论 | 第60-62页 |
| 第五章 AmyH酶学性质研究 | 第62-74页 |
| ·实验材料和仪器 | 第62-63页 |
| ·材料和试剂 | 第62页 |
| ·仪器和设备 | 第62-63页 |
| ·实验方法 | 第63-66页 |
| ·麦芽糖浓度标准曲线的绘制 | 第63页 |
| ·AmyH酶活力测定 | 第63页 |
| ·AmyH最适温度及温度稳定性研究 | 第63-64页 |
| ·AmyH最适pH及pH稳定性研究 | 第64页 |
| ·金属离子和抑制剂对AmyH酶活影响的研究 | 第64-65页 |
| ·有机试剂对AmyH酶活影响的研究 | 第65页 |
| ·AmyH酶动力学分析 | 第65页 |
| ·AmyH水解产物分析 | 第65-66页 |
| ·结果与分析 | 第66-72页 |
| ·标准曲线绘制结果 | 第66页 |
| ·AmyH最适温度及温度稳定性 | 第66-68页 |
| ·AmyH最适pH及pH稳定性 | 第68页 |
| ·金属离子和抑制剂对AmyH酶活的影响 | 第68-69页 |
| ·有机试剂对AmyH酶活的影响 | 第69-70页 |
| ·AmyH酶动力学参数 | 第70-71页 |
| ·AmyH的水解产物 | 第71-72页 |
| ·讨论 | 第72-74页 |
| 第六章 结论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-82页 |
| 作者在读期间论文发表情况 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83页 |