| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 目录 | 第6-10页 |
| 引言 | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-25页 |
| ·概述 | 第12-13页 |
| ·青蒿素合成生物学研究进展 | 第13-19页 |
| ·青蒿素生物合成研究历史 | 第13页 |
| ·青蒿素生物合成反应途径 | 第13-16页 |
| ·青蒿素合成的调控 | 第16-17页 |
| ·青蒿素前体的合成生物学研究进展 | 第17-18页 |
| ·青蒿素合成展望 | 第18-19页 |
| ·青蒿素的药用研究及其临床应用的拓展 | 第19-23页 |
| ·青蒿琥酯作为抗肿瘤药物增效剂 | 第20-22页 |
| ·青蒿琥酯作为抗生素增敏剂 | 第22-23页 |
| ·研究背景与设计思路 | 第23-24页 |
| ·主要研究内容 | 第24-25页 |
| 第二章 青蒿ALDH1基因分离和克隆 | 第25-34页 |
| ·材料 | 第25-26页 |
| ·菌种和质粒 | 第25页 |
| ·引物 | 第25页 |
| ·试剂和抗生素 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25页 |
| ·植物材料 | 第25页 |
| ·仪器 | 第25-26页 |
| ·方法 | 第26-27页 |
| ·植物RNA提取 | 第26-27页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第27页 |
| ·连接 | 第27页 |
| ·酶切鉴定和测序 | 第27页 |
| ·结果 | 第27-32页 |
| ·青蒿ALDH1基因扩增 | 第27页 |
| ·ALDH1基因克隆与鉴定 | 第27-28页 |
| ·ALDH1基因序列及其同源性分析 | 第28-32页 |
| ·讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 青蒿ALDH1基因在酵母中的表达及功能鉴定 | 第34-41页 |
| ·材料 | 第34页 |
| ·酵母与质粒 | 第34页 |
| ·试剂及试剂盒 | 第34页 |
| ·培养基 | 第34页 |
| ·植物材料 | 第34页 |
| ·仪器 | 第34页 |
| ·方法 | 第34-36页 |
| ·pGAPZ-ALDH1载体构建 | 第34-35页 |
| ·pESC-ALDH1载体构建 | 第35页 |
| ·酵母YPH501感受态细胞制备 | 第35页 |
| ·pESC-ALDH1转化酵母细胞 | 第35页 |
| ·青蒿无细胞提取液制备 | 第35-36页 |
| ·酵母工程菌发酵 | 第36页 |
| ·GC-MS检测 | 第36页 |
| ·结果 | 第36-40页 |
| ·重组整合载体pGAPZ-ALDH1构建与鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组非整合载体pESC-ALDH1构建与鉴定 | 第37页 |
| ·pESC-ALDH1转化 | 第37页 |
| ·GC-MS定量分析 | 第37-40页 |
| ·讨论 | 第40-41页 |
| 第四章 细菌NO合成的体外诱导与阻遏 | 第41-48页 |
| ·材料 | 第41页 |
| ·菌种 | 第41页 |
| ·培养基 | 第41页 |
| ·试剂 | 第41页 |
| ·实验仪器 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-42页 |
| ·细菌培养 | 第41页 |
| ·细菌处理 | 第41页 |
| ·细菌生长测定 | 第41-42页 |
| ·NO含量检测 | 第42页 |
| ·统计学分析 | 第42页 |
| ·结果 | 第42-47页 |
| ·缺氧、缺氧+冷、缺氧+药物处理后细菌NO含量变化 | 第42-43页 |
| ·细菌缺氧适应后添加抗生素的生长状态 | 第43-45页 |
| ·细菌添加抗生素或抗生素+青蒿琥酯后的生长及NO合成 | 第45-47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| 第五章 青蒿琥酯作为抗生素增敏剂的作用机理 | 第48-53页 |
| ·材料 | 第48页 |
| ·菌种 | 第48页 |
| ·培养基 | 第48页 |
| ·试剂及抗生素 | 第48页 |
| ·实验仪器 | 第48页 |
| ·方法 | 第48-49页 |
| ·细菌血红素-ART结合物鉴定 | 第48页 |
| ·细菌NO含量测定 | 第48页 |
| ·细菌过氧化氢酶活性测定 | 第48-49页 |
| ·统计学分析 | 第49页 |
| ·结果 | 第49-51页 |
| ·血红素-青蒿素结合物的形成动态 | 第49-50页 |
| ·细菌在添加青蒿琥酯后NO含量的变化 | 第50页 |
| ·细菌在与青蒿琥酯保温后过氧化氢酶活性的变化 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| 第六章 青蒿琥酯促进抗生素消除小鼠肠道感染效果 | 第53-61页 |
| ·材料 | 第53-54页 |
| ·菌种 | 第53页 |
| ·培养基 | 第53页 |
| ·试剂及抗生素 | 第53页 |
| ·实验仪器 | 第53页 |
| ·实验动物来源及实验环境 | 第53-54页 |
| ·方法 | 第54-55页 |
| ·细菌培养 | 第54页 |
| ·动物造模 | 第54页 |
| ·给药处理 | 第54-55页 |
| ·质粒提取 | 第55页 |
| ·血液NO值测量 | 第55页 |
| ·小鼠粪便细菌培养 | 第55页 |
| ·结果 | 第55-59页 |
| ·小鼠血清NO含量与大肠杆菌饲喂的关系 | 第55-56页 |
| ·小鼠粪便培养后菌落计数与大肠杆菌饲喂的关系 | 第56-57页 |
| ·小鼠粪便培养菌落中质粒的检测 | 第57页 |
| ·氨苄青霉素联用青蒿琥酯对大肠杆菌的抑制 | 第57-58页 |
| ·头抱菌素联用青蒿琥酯对氨苄青霉素抗性大肠杆菌的抑制 | 第58-59页 |
| ·利福平联用青蒿琥酯对地衣芽孢杆菌的抑制 | 第59页 |
| ·讨论 | 第59-61页 |
| 结语 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-69页 |
| 附录 | 第69-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
