| 目次 | 第1-9页 |
| 致谢 | 第9-10页 |
| 摘要 | 第10-13页 |
| ABSTRACT | 第13-17页 |
| 附件清单 | 第17-18页 |
| 缩写、符号清单、术语表 | 第18-19页 |
| 第一章 综述部分 | 第19-49页 |
| ·SOD抗氧化及其给药改造 | 第19-27页 |
| ·SOD的种类、进化及其结构 | 第20-22页 |
| SOD的种类 | 第20-21页 |
| SOD的进化 | 第21页 |
| SOD的结构 | 第21-22页 |
| ·SOD与肿瘤等疾病 | 第22-25页 |
| 肿瘤 | 第22-24页 |
| 急性炎症和水肿 | 第24页 |
| 辐射病和辐照防护 | 第24页 |
| 衰老 | 第24-25页 |
| ·SOD给药修饰 | 第25-27页 |
| SOD半衰期改造 | 第25页 |
| SOD透膜能力改造 | 第25-26页 |
| SOD靶向能力改造 | 第26-27页 |
| 其它改造 | 第27页 |
| ·ROS与肿瘤 | 第27-30页 |
| ·ROS的来源 | 第27页 |
| ·ROS水平影响细胞命运 | 第27-29页 |
| 氧化压力诱导细胞死亡 | 第28页 |
| 氧化压力刺激细胞增殖 | 第28页 |
| 还原压力与肿瘤细胞命运 | 第28-29页 |
| ·ROS引发的信号转导通路 | 第29-30页 |
| P13K/Akt信号通路 | 第29页 |
| P27信号通路 | 第29-30页 |
| cyt c信号通路 | 第30页 |
| Bcl-2信号通路 | 第30页 |
| ·获得性人类免疫缺病毒包膜糖蛋白 | 第30-33页 |
| ·获得性人类免疫缺陷综合症(AIDS) | 第30-31页 |
| ·HIV-1包膜糖蛋白(Envelop glycoprotein gp160,gp120,gp41) | 第31-32页 |
| ·抗HIV-1中和抗体的诱导 | 第32-33页 |
| ·本课题的研究目的、内容、技术路线及意义 | 第33-39页 |
| ·研究目的 | 第33-34页 |
| ·研究内容、方法 | 第34-36页 |
| ·研究技术路线 | 第36-38页 |
| ·研究意义 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-49页 |
| 第二章 Nostoc commune Fe-SOD的克隆、表达及体内外靶向投递 | 第49-81页 |
| ·前言 | 第49-50页 |
| ·材料与方法 | 第50-57页 |
| ·实验材料 | 第50-54页 |
| 试剂 | 第50-51页 |
| 器材 | 第51页 |
| 溶液 | 第51-52页 |
| 基本操作 | 第52-54页 |
| ·念珠藻的培养及基因组制备 | 第54页 |
| ·fe-sod基因克隆 | 第54页 |
| ·SOD表达载体的构建 | 第54页 |
| ·pET-SOD的表达和纯化 | 第54-55页 |
| ·SOD性质鉴定 | 第55页 |
| ·抗Fe-SOD抗血清制备以及不同物种SOD同源性比较 | 第55页 |
| ·双重荧光纳米磁靶向脂质体Fe-SOD的制备、投递 | 第55-56页 |
| ·SOD-FITC-Rh B-Mag-Lip抗SPC-A-1肿瘤细胞氧化压力 | 第56-57页 |
| ·SOD-FITC-Rh B-Mag-Lip体外抑制SPC-A-1肿瘤细胞增殖 | 第57页 |
| ·SOD-FITC-Rh B-iag-Lip体内靶向投递 | 第57页 |
| ·结果 | 第57-69页 |
| ·pET-SOD目标载体的构建 | 第57-59页 |
| ·Fe-SOD的表达和纯化 | 第59页 |
| ·Fe-SOD性质鉴定 | 第59页 |
| ·抗Fe-SOD抗血清制备以及各种SOD间同源性比较 | 第59-61页 |
| ·双重荧光纳米磁靶向脂质体Fe-SOD的制备、投递 | 第61-65页 |
| ·SOD-FITC-Rh B-Mag-Lip抗SPC-A-1细胞氧化压力 | 第65页 |
| ·SOD-FITC-Rh B-Mag-Lip体外抑制SPC-A-1肿瘤细胞增殖 | 第65-67页 |
| ·SOD-FITC-Rh B-Mag-Lip体内靶向投递 | 第67-69页 |
| ·讨论 | 第69-81页 |
| ·藻类Fe-SOD的生物信息学分析 | 第69-77页 |
| 进化分析 | 第69-70页 |
| 同源性分析 | 第70-74页 |
| 结构和功能分析 | 第74-75页 |
| Fe-SOD结构相关、功能依赖的进化特征 | 第75-77页 |
| ·重组Fe-SOD的临床应用前景 | 第77-81页 |
| 第三章 SPC-A-1肺肿瘤细胞靶向性SOD的克隆、靶向投递及抗肿瘤机理 | 第81-111页 |
| ·前言 | 第81-82页 |
| ·材料与方法 | 第82-88页 |
| ·实验材料 | 第82-83页 |
| 试剂 | 第82-83页 |
| 器材 | 第83页 |
| 溶液 | 第83页 |
| ·单链抗体ScFv的构建 | 第83-84页 |
| ·pET-SOD-ScFv融合载体的构建 | 第84-86页 |
| ·SOD、ScFv和SOD-ScFv的表达、纯化和活性鉴定 | 第86页 |
| ·SOD、SOD-ScFv与抗Fe-SOD抗血清的western blot免疫分析 | 第86页 |
| ·SOD-ScFv透膜能力的追踪,以及透膜后的稳定性分析 | 第86-87页 |
| ·SOD-ScFv靶向抗SPC-A-1肺腺癌细胞能力测定 | 第87页 |
| ·LSM分析胞内超氧阴离子和细胞质游离Ca~(2+)水平 | 第87页 |
| ·荧光分光光度计的线粒体膜电位(ΔΨ_m)分析 | 第87-88页 |
| ·流式细胞仪检测细胞氧化压力和还原压力 | 第88页 |
| ·胞内还原压力通过Akt/P27~(kipl)信号通路抑制肿瘤细胞增殖 | 第88页 |
| ·结果 | 第88-102页 |
| ·pET-SOD-ScFv载体的构建 | 第88-90页 |
| ·SOD、ScFv和SOD-ScFv的表达、纯化和活性鉴定 | 第90-92页 |
| ·SOD、SOD-ScFv与抗Fe-SOD抗血清的western blot免疫分析 | 第92-93页 |
| ·SOD-ScFv透膜荧光追踪,以及透膜后的稳定性分析 | 第93-95页 |
| ·SOD-ScFv靶向抗SPC-A-1肺腺癌细胞能力测定 | 第95-97页 |
| ·LSM分析胞内超氧阴离子和细胞质游离Ca~(2+)水平 | 第97-98页 |
| ·荧光分光光度计分析线粒体膜电位(ΔΨ_m) | 第98-100页 |
| ·流式细胞仪检测细胞氧化压力和还原压力 | 第100-101页 |
| ·还原压力通过Akt/P27~(kipl)信号通路抑制SPC-A-1肿瘤细胞增殖 | 第101-102页 |
| ·讨论 | 第102-111页 |
| 第四章 Ca~(2+)依赖的线粒体超氧爆发决定肿瘤细胞命运 | 第111-139页 |
| ·前言 | 第111-113页 |
| ·材料与方法 | 第113-117页 |
| ·实验材料 | 第114-115页 |
| 器材 | 第114页 |
| 溶液 | 第114-115页 |
| 数据统计分析 | 第115页 |
| ·氧化压力模型的建立 | 第115页 |
| ·氧化压力下细胞质游离Ca~(2+)和线粒体Ca~(2+)动力学研究 | 第115-116页 |
| ·氧化压力下ROS动力学研究 | 第116页 |
| ·线粒体活力之MTT还原与膜电位(ΔΨ_m)分析 | 第116页 |
| ·氧化压力下磷酸化Akt(P-Akt),Bcl-2表达水平和细胞色素c释放的western鉴定 | 第116-117页 |
| ·氧化压力下SPC-A-1肿瘤细胞命运 | 第117页 |
| ·结果 | 第117-126页 |
| ·氧化压力模型的建立 | 第117-119页 |
| ·氧化压力下细胞质游离Ca~(2+)和线粒体Ca~(2+)动力学研究 | 第119-121页 |
| ·氧化压力下ROS的动力学研究 | 第121-123页 |
| ·氧化压力下线粒体失活、Bcl-2非依赖的cyt c释放引起细胞死亡 | 第123-125页 |
| ·SPC-A-1肿瘤细胞在不同氧化压力下的信号转导和命运 | 第125-126页 |
| ·讨论 | 第126-139页 |
| ·超氧代谢网络 | 第126-129页 |
| ·Ca~(2+)信号在氧化压力下的传递途径 | 第129-132页 |
| ·SPC-A-1肿瘤细胞在不同氧化压力下的信号转导和细胞命运 | 第132-139页 |
| 第五章 Fe-SOD的产业化制备和临床研究 | 第139-149页 |
| ·前言 | 第139页 |
| ·材料与方法 | 第139-142页 |
| ·实验材料 | 第139-140页 |
| Fe-SOD纯化相关材料 | 第139-140页 |
| Fe-SOD胶囊制备相关材料 | 第140页 |
| 人体实验相关材料 | 第140页 |
| 仪器 | 第140页 |
| ·钝顶螺旋藻Fe-SOD的大规模纯化 | 第140-141页 |
| ·SOD酶活的测定 | 第141页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第141页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第141-142页 |
| ·钝顶螺旋藻Fe-SOD胶囊制备 | 第142页 |
| ·Fe-SOD胶囊抗氧化人体试食实验 | 第142页 |
| ·结果 | 第142-146页 |
| ·钝顶螺旋藻Fe-SOD的大规模纯化 | 第142-143页 |
| ·钝顶螺旋藻Fe-SOD的纯度分析 | 第143-144页 |
| ·钝顶螺旋藻Fe-SOD胶囊制备 | 第144页 |
| ·Fe-SOD胶囊抗氧化人体试食实验 | 第144-146页 |
| SOD胶囊安全性指标 | 第144-145页 |
| SOD胶囊功效指标 | 第145-146页 |
| ·讨论 | 第146-149页 |
| 第六章 人类免疫缺陷病毒中和抗体的靶向性诱导策略 | 第149-167页 |
| ·前言 | 第149-150页 |
| ·材料与方法 | 第150-155页 |
| ·实验材料 | 第150页 |
| ·可溶性HIV-1 Env三聚体的表达和纯化 | 第150-152页 |
| ·Lip-Env的制备 | 第152-153页 |
| ·Lip-Env的电镜形态 | 第153-154页 |
| ·Lip-Env的小鼠免疫 | 第154页 |
| ·血清抗HIV-1中和活性分析 | 第154-155页 |
| 假型病毒制备 | 第154-155页 |
| 假型病毒感染能力分析 | 第155页 |
| 血清抗HIV-1中和活性分析 | 第155页 |
| ·结果 | 第155-162页 |
| ·可溶性HIV-1 Env三聚体的表达和纯化 | 第155-157页 |
| ·Lip-Env的制备 | 第157-159页 |
| ·血清抗HIV-1中和活性分析 | 第159-162页 |
| ·讨论 | 第162-167页 |
| 第七章 总结与展望 | 第167-171页 |
| ·总结 | 第167-168页 |
| ·展望 | 第168-171页 |
| 博士期间科研成果(论文部分仅统计SCI收录论文) | 第171-173页 |
| 博士期间荣誉与奖励 | 第173页 |
