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电场诱导人晶状体上皮细胞上皮间质转分化的实验研究

缩略语表第7-10页
中文摘要第10-13页
Abstract第13-15页
前言第16-18页
文献回顾第18-34页
    第一部分 晶状体后囊膜混浊的研究现状第18-26页
        1. 流行病学第18页
        2. 发病机制第18-22页
            2.1 后发性白内障的组织病理学第18页
            2.2 植入人工晶状体后的细胞异物反应第18-19页
            2.3 炎性细胞第19页
            2.4 细胞外基质第19-20页
            2.5 基质金属蛋白酶第20页
            2.6 整合素第20页
            2.7 转化生长因子第20-21页
            2.8 成纤维生长因子第21页
            2.9 表皮生长因子第21-22页
            2.10 肿瘤坏死因子第22页
            2.11 胰岛素样生长因子第22页
        3. 治疗现状第22-26页
            3.1 水分离-清除晶状体上皮细胞第22-23页
            3.2 囊膜处理方式第23页
            3.3 激光后囊膜切开术第23-24页
            3.4 地塞米松缓释剂及非甾体抗炎药第24页
            3.5 抗代谢药物和EDTA第24-25页
            3.6 人工晶体类型第25页
            3.7 基因治疗第25-26页
    第二部分 直流电场对眼内细胞的生物学影响第26-34页
        1. 存在于角膜的电场第26-28页
        2. 存在于晶状体的电场第28-31页
        3. 存在于视网膜的电场第31-32页
        4. 电场对眼内细胞作用的相关机制第32-34页
            4.1 电场引起细胞膜表面受体的不对称分布第32页
            4.2 电场激活细胞内的相关信号通路第32-34页
实验一 电场对人晶状体上皮细胞作用模型的建立及细胞生物学活性的观察第34-49页
    1. 材料第34-36页
        1.1 细胞系第34页
        1.2 普通耗材第34-35页
        1.3 主要试剂第35页
        1.4 主要仪器第35-36页
    2. 方法第36-40页
        2.1 人晶状体上皮细胞(HLE-B3)的培养与鉴定第36-37页
            2.1.1 人晶状体上皮细胞的传代培养第36页
            2.1.2 人晶状体上皮细胞的鉴定第36页
            2.1.3 人晶状体上皮细胞的冻存第36页
            2.1.4 人晶状体上皮细胞的复苏第36-37页
            2.1.5 细胞爬片的制备第37页
        2.2 电场模型的制备第37-39页
        2.3 电场暴露第39-40页
            2.3.1 选择合适的电压第39页
            2.3.2 观察电压对人晶状体上皮细胞形态的影响第39页
            2.3.3 观察电压对人晶状体上皮细胞增殖能力的影响第39页
            2.3.4 流式细胞仪检测人晶状体上皮细胞的凋亡第39-40页
            2.3.5 流式细胞仪检测人晶状体上皮细胞的周期第40页
    3. 结果第40-46页
        3.1 人晶状体上皮细胞中 αA晶状体蛋白表达的检测第40-41页
        3.2 电场对人晶状体上皮细胞形态学的影响第41-42页
        3.3 电场对人晶状体上皮细胞凋亡的影响第42-43页
        3.4 电场对人晶状体上皮细胞增殖的影响第43-44页
        3.5 电场对人晶状体上皮细胞生长密度和生长率的影响第44-45页
        3.6 电场对人晶状体上皮细胞生长周期的影响第45-46页
    4. 讨论第46-49页
实验二 电场对人晶状体上皮细胞上皮间质转分化的作用第49-67页
    1. 材料第49-51页
        1.1 细胞系第49页
        1.2 普通耗材第49页
        1.3 主要试剂第49-50页
        1.4 主要仪器第50-51页
    2. 方法第51-59页
        2.1 qRT-PCR法检测EMT标志物的基因表达第51-53页
            2.1.1 总RNA的提取第51-52页
            2.1.2 RNA的分析第52页
            2.1.3 反转录第52页
            2.1.4 qRT-PCR第52-53页
        2.2 细胞免疫荧光染色第53-54页
        2.3 Western blot法检测EMT标志物的蛋白表达第54-59页
            2.3.1 细胞总蛋白的提取第54-55页
            2.3.2 BCA法进行蛋白定量第55页
            2.3.3 SDS-聚丙烯酞胺凝胶电泳第55-57页
            2.3.4 转膜第57-58页
            2.3.5 抗体孵育第58-59页
            2.3.6 显色第59页
    3. 结果第59-64页
        3.1 电场引起人晶状体上皮细胞上皮标志物E-cadherin表达下调第59-62页
        3.2 电场引起人晶状体上皮细胞间质标志物Vimentin表达上调第62-64页
    4. 讨论第64-67页
实验三 integrinβ1-FAK信号通路与电场诱导人晶状体上皮细胞上皮间质转分化之间的关系第67-82页
    1. 材料第67-69页
        1.1 细胞系第67页
        1.2 普通耗材第67页
        1.3 主要试剂第67-68页
        1.4 主要仪器第68-69页
    2. 方法第69-70页
        2.1 电场暴露第69页
        2.2 观察人晶状体上皮细胞形态的变化第69页
        2.3 Western blot法检测integrinβ1-FAK信号通路第69-70页
    3. 结果第70-80页
        3.1 电场引起人晶状体上皮细胞内integrinβ1-FAK信号通路的活化第70-74页
            3.1.1 电场引起人晶状体上皮细胞内integrinβ1 表达上调第70-72页
            3.1.2 电场引起人晶状体上皮细胞内pFAK表达上调第72-74页
        3.2 integrinβ1-FAK信号通路与电场诱导EMT间的关系第74-80页
            3.2.1 integrinβ1 影响电场诱导人晶状体上皮细胞发生形态改变第74页
            3.2.2 FAK不影响电场诱导人晶状体上皮细胞发生形态改变第74-75页
            3.2.3 integrinβ1 抑制剂对电场诱导的EMT标志物表达的影响第75-77页
            3.2.4 FAK抑制剂对电场诱导的EMT标志物表达的影响第77-80页
    4. 讨论第80-82页
小结第82-84页
参考文献第84-97页
个人简历和研究成果第97-99页
致谢第99页

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