缩略语表 | 第7-10页 |
中文摘要 | 第10-13页 |
Abstract | 第13-15页 |
前言 | 第16-18页 |
文献回顾 | 第18-34页 |
第一部分 晶状体后囊膜混浊的研究现状 | 第18-26页 |
1. 流行病学 | 第18页 |
2. 发病机制 | 第18-22页 |
2.1 后发性白内障的组织病理学 | 第18页 |
2.2 植入人工晶状体后的细胞异物反应 | 第18-19页 |
2.3 炎性细胞 | 第19页 |
2.4 细胞外基质 | 第19-20页 |
2.5 基质金属蛋白酶 | 第20页 |
2.6 整合素 | 第20页 |
2.7 转化生长因子 | 第20-21页 |
2.8 成纤维生长因子 | 第21页 |
2.9 表皮生长因子 | 第21-22页 |
2.10 肿瘤坏死因子 | 第22页 |
2.11 胰岛素样生长因子 | 第22页 |
3. 治疗现状 | 第22-26页 |
3.1 水分离-清除晶状体上皮细胞 | 第22-23页 |
3.2 囊膜处理方式 | 第23页 |
3.3 激光后囊膜切开术 | 第23-24页 |
3.4 地塞米松缓释剂及非甾体抗炎药 | 第24页 |
3.5 抗代谢药物和EDTA | 第24-25页 |
3.6 人工晶体类型 | 第25页 |
3.7 基因治疗 | 第25-26页 |
第二部分 直流电场对眼内细胞的生物学影响 | 第26-34页 |
1. 存在于角膜的电场 | 第26-28页 |
2. 存在于晶状体的电场 | 第28-31页 |
3. 存在于视网膜的电场 | 第31-32页 |
4. 电场对眼内细胞作用的相关机制 | 第32-34页 |
4.1 电场引起细胞膜表面受体的不对称分布 | 第32页 |
4.2 电场激活细胞内的相关信号通路 | 第32-34页 |
实验一 电场对人晶状体上皮细胞作用模型的建立及细胞生物学活性的观察 | 第34-49页 |
1. 材料 | 第34-36页 |
1.1 细胞系 | 第34页 |
1.2 普通耗材 | 第34-35页 |
1.3 主要试剂 | 第35页 |
1.4 主要仪器 | 第35-36页 |
2. 方法 | 第36-40页 |
2.1 人晶状体上皮细胞(HLE-B3)的培养与鉴定 | 第36-37页 |
2.1.1 人晶状体上皮细胞的传代培养 | 第36页 |
2.1.2 人晶状体上皮细胞的鉴定 | 第36页 |
2.1.3 人晶状体上皮细胞的冻存 | 第36页 |
2.1.4 人晶状体上皮细胞的复苏 | 第36-37页 |
2.1.5 细胞爬片的制备 | 第37页 |
2.2 电场模型的制备 | 第37-39页 |
2.3 电场暴露 | 第39-40页 |
2.3.1 选择合适的电压 | 第39页 |
2.3.2 观察电压对人晶状体上皮细胞形态的影响 | 第39页 |
2.3.3 观察电压对人晶状体上皮细胞增殖能力的影响 | 第39页 |
2.3.4 流式细胞仪检测人晶状体上皮细胞的凋亡 | 第39-40页 |
2.3.5 流式细胞仪检测人晶状体上皮细胞的周期 | 第40页 |
3. 结果 | 第40-46页 |
3.1 人晶状体上皮细胞中 αA晶状体蛋白表达的检测 | 第40-41页 |
3.2 电场对人晶状体上皮细胞形态学的影响 | 第41-42页 |
3.3 电场对人晶状体上皮细胞凋亡的影响 | 第42-43页 |
3.4 电场对人晶状体上皮细胞增殖的影响 | 第43-44页 |
3.5 电场对人晶状体上皮细胞生长密度和生长率的影响 | 第44-45页 |
3.6 电场对人晶状体上皮细胞生长周期的影响 | 第45-46页 |
4. 讨论 | 第46-49页 |
实验二 电场对人晶状体上皮细胞上皮间质转分化的作用 | 第49-67页 |
1. 材料 | 第49-51页 |
1.1 细胞系 | 第49页 |
1.2 普通耗材 | 第49页 |
1.3 主要试剂 | 第49-50页 |
1.4 主要仪器 | 第50-51页 |
2. 方法 | 第51-59页 |
2.1 qRT-PCR法检测EMT标志物的基因表达 | 第51-53页 |
2.1.1 总RNA的提取 | 第51-52页 |
2.1.2 RNA的分析 | 第52页 |
2.1.3 反转录 | 第52页 |
2.1.4 qRT-PCR | 第52-53页 |
2.2 细胞免疫荧光染色 | 第53-54页 |
2.3 Western blot法检测EMT标志物的蛋白表达 | 第54-59页 |
2.3.1 细胞总蛋白的提取 | 第54-55页 |
2.3.2 BCA法进行蛋白定量 | 第55页 |
2.3.3 SDS-聚丙烯酞胺凝胶电泳 | 第55-57页 |
2.3.4 转膜 | 第57-58页 |
2.3.5 抗体孵育 | 第58-59页 |
2.3.6 显色 | 第59页 |
3. 结果 | 第59-64页 |
3.1 电场引起人晶状体上皮细胞上皮标志物E-cadherin表达下调 | 第59-62页 |
3.2 电场引起人晶状体上皮细胞间质标志物Vimentin表达上调 | 第62-64页 |
4. 讨论 | 第64-67页 |
实验三 integrinβ1-FAK信号通路与电场诱导人晶状体上皮细胞上皮间质转分化之间的关系 | 第67-82页 |
1. 材料 | 第67-69页 |
1.1 细胞系 | 第67页 |
1.2 普通耗材 | 第67页 |
1.3 主要试剂 | 第67-68页 |
1.4 主要仪器 | 第68-69页 |
2. 方法 | 第69-70页 |
2.1 电场暴露 | 第69页 |
2.2 观察人晶状体上皮细胞形态的变化 | 第69页 |
2.3 Western blot法检测integrinβ1-FAK信号通路 | 第69-70页 |
3. 结果 | 第70-80页 |
3.1 电场引起人晶状体上皮细胞内integrinβ1-FAK信号通路的活化 | 第70-74页 |
3.1.1 电场引起人晶状体上皮细胞内integrinβ1 表达上调 | 第70-72页 |
3.1.2 电场引起人晶状体上皮细胞内pFAK表达上调 | 第72-74页 |
3.2 integrinβ1-FAK信号通路与电场诱导EMT间的关系 | 第74-80页 |
3.2.1 integrinβ1 影响电场诱导人晶状体上皮细胞发生形态改变 | 第74页 |
3.2.2 FAK不影响电场诱导人晶状体上皮细胞发生形态改变 | 第74-75页 |
3.2.3 integrinβ1 抑制剂对电场诱导的EMT标志物表达的影响 | 第75-77页 |
3.2.4 FAK抑制剂对电场诱导的EMT标志物表达的影响 | 第77-80页 |
4. 讨论 | 第80-82页 |
小结 | 第82-84页 |
参考文献 | 第84-97页 |
个人简历和研究成果 | 第97-99页 |
致谢 | 第99页 |