| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-22页 |
| ·烟草脉带花叶病毒研究历史及现状 | 第10-11页 |
| ·烟草脉带花叶病毒病的发生 | 第10页 |
| ·烟草脉带花叶病毒的生物学特性 | 第10-11页 |
| ·烟草脉带花叶病毒的病原分子生物学研究 | 第11页 |
| ·植物病毒鉴定和检测技术研究进展 | 第11-14页 |
| ·生物学方法 | 第11页 |
| ·血清学方法 | 第11-12页 |
| ·电子显微镜技术 | 第12-13页 |
| ·以分子生物学技术为基础的病毒检测方法 | 第13页 |
| ·讨论 | 第13-14页 |
| ·胶体金免疫层析技术概述 | 第14-20页 |
| ·免疫胶体金技术研究历史 | 第14页 |
| ·胶体金免疫层析技术的原理与分类 | 第14-17页 |
| ·胶体金免疫层析技术的优点 | 第17-18页 |
| ·免疫胶体金标记技术在植物保护研究上的应用 | 第18-20页 |
| ·免疫胶体金技术发展前景 | 第20页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第20-22页 |
| 第二章 烟草脉带花叶病毒CP 基因的克隆 | 第22-31页 |
| ·材料 | 第22页 |
| ·所需仪器和试剂耗材 | 第22-23页 |
| ·仪器 | 第22页 |
| ·菌种、质粒和试剂 | 第22-23页 |
| ·陕西分离物TVBMV CP 基因的克隆及测序 | 第23-27页 |
| ·病毒RNA 的提取和cDNA 的合成 | 第23页 |
| ·TVBMV 3′端目的片段的克隆 | 第23-24页 |
| ·PCR 产物纯化 | 第24页 |
| ·连接反应 | 第24页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第24-25页 |
| ·转化和筛选 | 第25页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第25-26页 |
| ·序列测定与同源性分析 | 第26-27页 |
| ·TVBMV CP 基因的克隆 | 第27页 |
| ·结果与分析 | 第27-30页 |
| ·TVBMV 在烟草上引起的症状 | 第27页 |
| ·RNA 的提取与检测 | 第27-28页 |
| ·TVBMV CP 基因的扩增 | 第28-29页 |
| ·TVBMV CP 基因序列分析 | 第29-30页 |
| ·讨论 | 第30-31页 |
| 第三章 TVBMV CP 基因的表达与抗血清制备 | 第31-40页 |
| ·材料 | 第31-32页 |
| ·供试毒源 | 第31页 |
| ·菌种与载体 | 第31页 |
| ·试剂 | 第31页 |
| ·溶液配制 | 第31-32页 |
| ·TVBMV CP 基因在大肠杆菌中的表达 | 第32-34页 |
| ·构建pET30-TVBMVCP 表达载体 | 第32-33页 |
| ·TVBMV CP 基因在大肠杆菌中的表达 | 第33-34页 |
| ·SDS-PAGE | 第34页 |
| ·表达蛋白的纯化 | 第34页 |
| ·多克隆抗体的制备及鉴定 | 第34-36页 |
| ·抗血清的制备 | 第34页 |
| ·间接ELISA 测定抗血清效价 | 第34-35页 |
| ·抗血清的纯化 | 第35页 |
| ·原核表达蛋白的 Western bolt 检测 | 第35-36页 |
| ·结果与分析 | 第36-38页 |
| ·pET30-TVBMV CP 表达载体的构建与鉴定 | 第36页 |
| ·TVBMV CP 基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第36-37页 |
| ·抗血清的制备与ELISA 测定效价 | 第37页 |
| ·TVBMV 多克隆抗体的纯化 | 第37-38页 |
| ·Western blot 的鉴定结果 | 第38页 |
| ·讨论 | 第38-40页 |
| 第四章 TVBMV 胶体金免疫层析试纸条的研制 | 第40-49页 |
| ·材料 | 第40页 |
| ·20 NM 胶体金颗粒的制备 | 第40页 |
| ·制备前的器皿清洁和试剂配制要求 | 第40页 |
| ·柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒 | 第40页 |
| ·胶体金标记抗体的制备 | 第40-41页 |
| ·待标记抗体溶液的准备 | 第40-41页 |
| ·待标胶体金溶液的准备 | 第41页 |
| ·待标记抗体最适用量的测定 | 第41页 |
| ·标记 | 第41页 |
| ·金标抗体的纯化 | 第41页 |
| ·试纸条的制备与组装 | 第41-42页 |
| ·金标抗体与玻璃纤维膜的结合 | 第41-42页 |
| ·抗体包被硝酸纤维素膜 | 第42页 |
| ·试纸条的组装 | 第42页 |
| ·测试方法和判定标准 | 第42-43页 |
| ·试纸条性能鉴定 | 第43页 |
| ·特异性检测 | 第43页 |
| ·灵敏性检测 | 第43页 |
| ·稳定性检测 | 第43页 |
| ·田间样品的检测 | 第43页 |
| ·结果与分析 | 第43-47页 |
| ·胶体金制备结果鉴定 | 第43页 |
| ·最佳抗体标记量的确定 | 第43-44页 |
| ·标记结果鉴定 | 第44页 |
| ·判断标准 | 第44-45页 |
| ·特异性测试 | 第45页 |
| ·灵敏性测试 | 第45页 |
| ·稳定性测试 | 第45页 |
| ·田间样品的快速检测 | 第45-47页 |
| ·讨论 | 第47-49页 |
| ·胶体金的制备 | 第47页 |
| ·胶体金标记抗体的制备 | 第47页 |
| ·NC 膜的选择 | 第47-48页 |
| ·TVBMV 胶体金免疫层析(GICA)试纸条制作原理 | 第48-49页 |
| 第五章 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 作者简介 | 第56页 |