| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 英文缩略表 | 第11-12页 |
| 第一章 综述 | 第12-24页 |
| 1 血管内皮细胞生长因子（VEGF）的研究进展 | 第12-15页 |
| ·VEGF 的分子结构 | 第12页 |
| ·VEGF 家族与VEGF 的受体(VEGFR) | 第12-15页 |
| ·VEGF 家族成员 | 第12-14页 |
| ·VEGF 的受体(VEGFR) | 第14-15页 |
| 2 VEGF 基因表达及其调控因素 | 第15-16页 |
| ·缺血和缺氧 | 第15页 |
| ·细胞因子 | 第15-16页 |
| ·其它因素 | 第16页 |
| 3 VEGF 的生物学功能及其相关应用 | 第16-19页 |
| ·VEGF 生物学功能 | 第16-17页 |
| ·VEGF 的相关应用 | 第17-19页 |
| 4 血管内皮细胞生长因子C(VEGF-C)研究进展 | 第19-22页 |
| ·VEGF-C 基因结构 | 第19页 |
| ·VEGF-C 的受体结合 | 第19-20页 |
| ·VEGF-C 基因表达调节因素 | 第20页 |
| ·VEGF-C 的生物学功能及相关疾病的研究 | 第20-22页 |
| ·VEGF-C 的应用研究 | 第22页 |
| 5 VEGF-C 在动物医学中应用研究与意义 | 第22-23页 |
| 6 本实验研究的目的与意义 | 第23-24页 |
| 第二章 PGEX-VEGF-C 的原核表达载体的构建及鉴定 | 第24-38页 |
| 1 材料与方法 | 第24-31页 |
| ·材料 | 第24-25页 |
| ·模板与载体 | 第24页 |
| ·工程菌:大肠杆菌JM109 (Promega，Cat. No:P2251) | 第24页 |
| ·酶及主要试剂 | 第24-25页 |
| ·仪器设备 | 第25页 |
| ·方法 | 第25-31页 |
| ·化学合成基因片段与引物设计 | 第25-26页 |
| ·VEGF-C 基因的常规PCR 扩增与检测 | 第26页 |
| ·PCR 扩增产物的回收与纯化 | 第26-27页 |
| ·SDS 碱裂解法提取pGEX-6P-1 载体质粒 | 第27-28页 |
| ·PCR 产物与pGEX-6P-1 载体的双酶切产物回收 | 第28页 |
| ·回收产物的连接与转化方法 | 第28-30页 |
| ·重组质粒的筛选鉴定 | 第30-31页 |
| ·基因序列的测定分析 | 第31页 |
| 2 结果与分析 | 第31-35页 |
| ·目的基因的常规PCR 扩增结果 | 第31-32页 |
| ·琼脂糖凝胶提取质粒的检测结果 | 第32页 |
| ·重组质粒的鉴定结果 | 第32-35页 |
| ·PCR 鉴定结果 | 第32-33页 |
| ·双酶切鉴定结果 | 第33-34页 |
| ·基因序列的鉴定 | 第34-35页 |
| 3 讨论 | 第35-38页 |
| ·生物信息学的应用 | 第35页 |
| ·表达系统和表达载体的选择 | 第35-36页 |
| ·PGEX/VEGF-C 重组体构建中的注意事项 | 第36-38页 |
| 第三章 PGEX-VEGF-C 在大肠杆菌中的表达与纯化 | 第38-51页 |
| 1 材料与方法 | 第38-43页 |
| ·材料 | 第38-39页 |
| ·主要试剂及溶液 | 第38-39页 |
| ·菌株与重组质粒 | 第39页 |
| ·仪器设备 | 第39页 |
| ·方法 | 第39-43页 |
| ·E.coli BL21(DE3)感受态细胞的制备 | 第39页 |
| ·重组质粒pGEX-VEGF-C 转化入BL21(DE3) | 第39-40页 |
| ·转化子的试表达及SDS-PAGE 电泳检测 | 第40-41页 |
| ·阳性转化子pGEX-VEGF-C 在BL21(DE3)中蛋白大量表达的诱导条件优化 | 第41-42页 |
| ·GST 融合蛋白的谷胱甘肽－琼脂糖亲和层析(Glutathion SepharoseTM48)纯化 | 第42-43页 |
| 2 结果与分析 | 第43-47页 |
| ·转化子的试表达结果 | 第43页 |
| ·PGEX-VEGF-C 在BL21(DE3)中蛋白的诱导表达条件的优化 | 第43-46页 |
| ·IPTG 诱导浓度的优化 | 第43-44页 |
| ·诱导温度的确定 | 第44页 |
| ·IPTG 诱导时间的确定 | 第44-45页 |
| ·重组蛋白pGEX-VEGF-C 表达形式的鉴定结果 | 第45-46页 |
| ·重组融合蛋白的谷胱甘肽－琼脂糖亲和层析纯化结果与分析 | 第46-47页 |
| 3 讨论 | 第47-51页 |
| ·蛋白表达条件的优化 | 第47-48页 |
| ·谷胱甘肽琼脂糖亲和层析 | 第48页 |
| ·纯化条件的探讨 | 第48-49页 |
| ·晶体的培养 | 第49-50页 |
| ·VEGF-C 鼠源性单克隆抗体制备和在动物临床上的实验研究 | 第50-51页 |
| 全文总结 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-56页 |
| 附录 | 第56-58页 |
| 本论文所用到的其它仪器设备有 | 第58-59页 |
| 本论文所用的培养基、试剂和溶液的配制 | 第59-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
