| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略语表 | 第10-12页 |
| 1 前言 | 第12-37页 |
| ·古菌概述 | 第12-15页 |
| ·硫化叶菌概述 | 第15-19页 |
| ·古菌中的遗传体系 | 第19-24页 |
| ·选择标记 | 第19-20页 |
| ·转化方法 | 第20页 |
| ·质粒载体 | 第20-21页 |
| ·基因敲除体系 | 第21-24页 |
| ·基因表达分析 | 第24页 |
| ·硫化叶菌遗传体系的发展历程和现况 | 第24-32页 |
| ·ABV polB简介 | 第32-33页 |
| ·CRISPR概述 | 第33-36页 |
| ·研究的目的与意义 | 第36-37页 |
| 2 材料与方法 | 第37-47页 |
| ·菌株、质粒和病毒 | 第37页 |
| ·培养基配方以及培养条件 | 第37-39页 |
| ·主要分子生物学试剂和由公司完成的实验 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-47页 |
| ·硫化叶菌总DNA和质粒DNA的提取 | 第39-40页 |
| ·冰岛硫化叶菌pyrEF突变株的分离 | 第40页 |
| ·感受态的制备及其电转化 | 第40页 |
| ·质粒构建 | 第40-42页 |
| ·硫化叶菌菌液PCR,长片段PCR,SOE-PCR和定量PCR | 第42-43页 |
| ·大片段DNA MCS的合成 | 第43页 |
| ·β-galactosidase(LacS)酶活测定 | 第43-44页 |
| ·Southern杂交 | 第44-45页 |
| ·蛋白表达纯化 | 第45页 |
| ·SDS-PAGE和Western杂交 | 第45-46页 |
| ·生物信息学分析 | 第46-47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-72页 |
| ·基本遗传体系的建立 | 第47-56页 |
| ·分离鉴定pyrEF缺失突变株 | 第47-48页 |
| ·基本穿梭和敲除载体的构建 | 第48-49页 |
| ·穿梭和敲除载体的转化子分析 | 第49-56页 |
| ·穿梭载体的转化及其稳定性和拷贝数 | 第49-51页 |
| ·敲除载体的转化子分析 | 第51-56页 |
| ·基于穿梭质粒的基因互补 | 第56页 |
| ·基因敲除体系的应用 | 第56-61页 |
| ·CBP基因的敲除和基于同源重组的基因互补 | 第56-59页 |
| ·Sso3071同源基因的敲除 | 第59页 |
| ·pK0693,pKTFB2和pKTFB3的转化子分析 | 第59-61页 |
| ·基因表达载体的构建及其初步应用 | 第61-67页 |
| ·基因表达载体的构建 | 第61-64页 |
| ·基因表达载体的应用 | 第64-67页 |
| ·lacS基因表达,纯化和鉴定 | 第64-66页 |
| ·ABV polB在硫化叶菌中表达为可溶蛋白 | 第66-67页 |
| ·遗传体系在CRISPR研究中的初步应用 | 第67-72页 |
| 4 讨论与展望 | 第72-76页 |
| ·基因敲除策略的改进 | 第72-74页 |
| ·遗传体系用于古菌表达调控研究 | 第74-75页 |
| ·遗传体系用于古菌CRISPR研究 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-84页 |
| 附录 | 第84-98页 |
| 博士期间学术成果 | 第98-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
