| 目录 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-23页 |
| ·番茄果实成熟过程中的生理变化 | 第12-13页 |
| ·乙烯与番茄果实成熟的关系 | 第13-15页 |
| ·主要果胶水解酶与果实成熟的关系 | 第15-18页 |
| ·多聚半乳糖醛酸酶(PG) | 第15-17页 |
| ·果胶甲酯酶(PE) | 第17页 |
| ·果胶酸裂解酶(PL) | 第17-18页 |
| ·番茄成熟过程相关基因的研究 | 第18-19页 |
| ·本研究的目的、意义 | 第19-20页 |
| ·技术路线 | 第20-23页 |
| ·番茄LePeIC、LeAPETALA2LIKE全长cDNA和反义cDNA的克隆 | 第20-21页 |
| ·番茄LePeIC、LeAPETALA2LIKE全长cDNA和反义cDNA表达载体构建 | 第21-22页 |
| ·番茄LePeIC、LeAPETALA2LIKE在番茄果实成熟过程中的表达分析 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-36页 |
| ·材料与试剂 | 第23-24页 |
| ·植物材料、质粒、菌株、试剂 | 第23页 |
| ·常用试剂配制 | 第23-24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24页 |
| ·RNA提取及处理实验方法 | 第24-26页 |
| ·番茄果实总RNA提取 | 第24-25页 |
| ·用DNA酶处理RNA | 第25页 |
| ·核酸质量及浓度测定 | 第25-26页 |
| ·LePeIC和LeAPETALA2LIKE的克隆 | 第26-31页 |
| ·引物设计 | 第26-27页 |
| ·RT-PCR | 第27-28页 |
| ·PCR产物的回收和纯化 | 第28页 |
| ·重组质粒的转化及鉴定 | 第28-30页 |
| ·序列测定及系统树分析 | 第30-31页 |
| ·LePeIC和LeAPETALA2LIKE的过量表达载体和反义表达载体的构建 | 第31-32页 |
| ·载体pMD19T-LePeIC、pMD19T-LeAPETALA2LIKE和载体pMD19T-rLePeIC、pMD19T-rLeAPETALA2LIKE以及表达载体pB1121的双酶切以分离目的片断 | 第31-32页 |
| ·LePeIC、LeAPETALA2LIKE基因片断和rLePeIC、rLeAPETALA2LIKE目的片断的回收 | 第32页 |
| ·目的基因与载体pB1121的连接 | 第32页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第32页 |
| ·重组质粒转化农杆菌 | 第32-34页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备(电击法) | 第32-33页 |
| ·农杆菌的转化(电击法) | 第33页 |
| ·阳性农杆菌鉴定 | 第33-34页 |
| ·LePeIC和LeAPETALA2LIKE的表达分析 | 第34-36页 |
| ·LePeIC和LeAPETALA2LIKE的半定量PCR分析 | 第34-35页 |
| ·LePeIC和LeAPETALA2LIKE基因表达的定量研究 | 第35-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-49页 |
| ·LePeIC和LeAPETALA2LIKE基因以及用于构建反义表达载体的LePeIG和LeAPETALA2LIKE基因片断的克隆、测序分析和系统树分析 | 第36-41页 |
| ·LePeIC和LeAPETALA2LIKE过量表达载体和反义抑制表达载体的构建 | 第41-45页 |
| ·载体构建流程 | 第41-43页 |
| ·PCR扩增检测 | 第43-44页 |
| ·重组质粒转化大肠杆菌DH5α双酶切鉴定 | 第44页 |
| ·重组质粒转入农杆菌EHA105的PCR验证 | 第44-45页 |
| ·LePeIC和LeAPETALA2LIKE的表达分析 | 第45-49页 |
| ·半定量PCR分析番茄LePeIC和LeAPETALA2LIKE在不同成熟时期果实中的表达 | 第45-46页 |
| ·Real-time PCR分析番茄LePeIC和LeAPETALA2LIKE在不同成熟时期果实中的表达 | 第46-49页 |
| 4 讨论 | 第49-52页 |
| ·番茄总RNA的提取 | 第49页 |
| ·克隆结果 | 第49-50页 |
| ·转化植物的双元表达载体的构建 | 第50页 |
| ·番茄果胶酸裂解酶基因(LePeIC)和番茄LeAPETALA2LIKE基因在果实成熟过程中的表达分析 | 第50-52页 |
| 5 本研究的重要结果及创新点 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
