| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-18页 |
| 专业名词缩写中英文对照表 | 第18-19页 |
| 前言 | 第19-21页 |
| 第一章 hEF体系培养的hESCs向限定性内胚层的诱导分化 | 第21-53页 |
| 技术路线 | 第23-24页 |
| 1. 材料和方法 | 第24-32页 |
| ·材料与试剂 | 第24-26页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| ·hESCs的培养与鉴定 | 第26-27页 |
| ·hESCs的核型分析 | 第27-28页 |
| ·端粒酶检测 | 第28页 |
| ·hESCs向限定性内胚层诱导 | 第28-32页 |
| ·hESCs来源的限定性内胚层分化潜能的检测 | 第32页 |
| ·统计学处理 | 第32页 |
| 2. 结果 | 第32-36页 |
| ·hESCs的培养 | 第32页 |
| ·hESCs的鉴定 | 第32-33页 |
| ·hESCs自发分化潜能的检测 | 第33页 |
| ·hESCs向限定性内胚层诱导 | 第33-35页 |
| ·诱导5天获得的内胚层细胞的进一步分化能力的检测 | 第35-36页 |
| 3. 讨论 | 第36-39页 |
| 4. 结论 | 第39-40页 |
| 附图 | 第40-53页 |
| 第二章 hEF细胞支持限定性内胚层分化的机制研究 | 第53-75页 |
| 技术路线 | 第54-55页 |
| 1. 材料与方法 | 第55-61页 |
| ·材料与试剂 | 第55-56页 |
| ·主要仪器 | 第56页 |
| ·hESCs的培养及向限定性内胚层诱导方法 | 第56-58页 |
| ·免疫荧光染色 | 第58页 |
| ·PCR检测转录因子 | 第58-59页 |
| ·蛋白质提取和Western检测 | 第59-61页 |
| ·统计学处理 | 第61页 |
| 2. 结果 | 第61-64页 |
| ·H组、M组、FF组三种诱导体系下限定性内胚层的诱导效果 | 第61页 |
| ·hEF细胞分泌可溶性因子促进hESCs向限定性内胚层分化 | 第61-62页 |
| ·hEF细胞在hES培养基及RPMI1640处理后基因表达变化 | 第62页 |
| ·Western检测Wnt下游β-catenin的表达 | 第62页 |
| ·半定量PCR检测Wnt下游靶基因表达 | 第62页 |
| ·Wnt3a和ActivinA不同诱导时间点Sox17和Brachyury染色结果 | 第62-63页 |
| ·PCR检测原肠作用及三胚层发育相关基因表达变化 | 第63页 |
| ·不同诱导体系下Sox17阳性率比较 | 第63-64页 |
| 3. 讨论 | 第64-66页 |
| 4. 结论 | 第66-67页 |
| 附图 | 第67-75页 |
| 第三章 孤雌与正常来源hESCs向胰岛样细胞诱导 | 第75-98页 |
| 分化比较研究 | 第75-77页 |
| 技术路线 | 第77页 |
| 1. 材料与方法 | 第77-84页 |
| ·材料与试剂 | 第77-78页 |
| ·主要仪器 | 第78-79页 |
| ·细胞培养 | 第79页 |
| ·免疫组化 | 第79-80页 |
| ·未分化hESCs流式计数SSEA4阳性细胞率 | 第80-81页 |
| ·RNA的抽提 | 第81页 |
| ·RT-PCR检测 | 第81页 |
| ·relatime PCR检测标记基因的差异 | 第81-83页 |
| ·胰岛素释放实验 | 第83-84页 |
| 2. 结果 | 第84-87页 |
| ·未分化hESCs流式计数结果 | 第84页 |
| ·免疫染色结果 | 第84-85页 |
| ·realtime PCR结果 | 第85-86页 |
| ·Ki67表达结果 | 第86页 |
| ·胰岛素分泌细胞检测结果 | 第86-87页 |
| 3. 讨论 | 第87-89页 |
| 4. 结论 | 第89-90页 |
| 附图 | 第90-98页 |
| 总结 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-105页 |
| 综述 | 第105-128页 |
| 致谢 | 第128-129页 |
| 在读博士期间发表的论文目录 | 第129-130页 |
| 个人简历 | 第130页 |
| 学历和工作经历 | 第130页 |
| 奖励 | 第130页 |
