| 摘要 | 第9-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 第一部分 绪论 | 第14-20页 |
| 1 复发与多药耐药是影响MM预后最重要的因素之一 | 第14页 |
| 2 染色体不稳定性与MM患者预后密切相关 | 第14页 |
| 3 骨髓微环境是MM复发与耐药的重要因素之一 | 第14页 |
| 4 检验点激酶CHEK1在MM患者病程发展及生存周期中扮演重要角色 | 第14-16页 |
| 5 中医与多发性骨髓瘤 | 第16-17页 |
| 6 本论文的研究思路与内容 | 第17-19页 |
| 7 本论文的预期结果与意义 | 第19-20页 |
| 第二部分 CHEK1引发MM细胞CIN和骨破坏的机制研究 | 第20-56页 |
| 第一章 CHEK1过表达和敲低的MM细胞株构建与验证 | 第20-30页 |
| 1.1 前言 | 第20页 |
| 1.2 材料 | 第20-22页 |
| 1.2.1 细胞、试剂与抗体 | 第20-22页 |
| 1.2.2 实验器材 | 第22页 |
| 1.3 方法 | 第22-27页 |
| 1.3.1 细胞培养 | 第22-23页 |
| 1.3.2 感受态制备 | 第23-24页 |
| 1.3.3 质粒提取 | 第24页 |
| 1.3.4 慢病毒包装 | 第24页 |
| 1.3.5 细胞转染及稳转株筛选 | 第24页 |
| 1.3.6 蛋白质免疫印迹(Western Blot) | 第24-27页 |
| 1.4 结果和讨论 | 第27-29页 |
| 1.4.1 BCA测定蛋白质浓度 | 第27-28页 |
| 1.4.2 Western Blot法检测骨髓瘤细胞稳转株中CHEK1蛋白质表达水平 | 第28-29页 |
| 1.5 小结 | 第29-30页 |
| 第二章 CHEK1过表达促进骨髓瘤细胞株增殖与耐药 | 第30-39页 |
| 2.1 前言 | 第30页 |
| 2.2 材料 | 第30-32页 |
| 2.2.1 细胞、试剂与抗体 | 第30-31页 |
| 2.2.2 实验器材 | 第31-32页 |
| 2.3 方法 | 第32-34页 |
| 2.3.1 台盼蓝计数 | 第32页 |
| 2.3.2 软琼脂克隆 | 第32-33页 |
| 2.3.3 流式细胞术检测周期与凋亡 | 第33-34页 |
| 2.3.4 MTT检测 | 第34页 |
| 2.3.5 Western blot检测凋亡因子 | 第34页 |
| 2.4 结果和讨论 | 第34-38页 |
| 2.4.1 CHEK1对MM细胞增殖的影响 | 第34-35页 |
| 2.4.2 CHEK1对MM细胞周期分布的影响 | 第35-36页 |
| 2.4.3 CHEK1对MM细胞耐药性影响 | 第36-38页 |
| 2.5 小结 | 第38-39页 |
| 第三章 CHEK1过表达促进MM细胞株CIN及机制研究 | 第39-49页 |
| 3.1 前言 | 第39-40页 |
| 3.2 材料 | 第40-41页 |
| 3.2.1 细胞、试剂与抗体 | 第40-41页 |
| 3.2.2 实验器材 | 第41页 |
| 3.3 方法 | 第41-44页 |
| 3.3.1 细胞有丝分裂期同步化处理 | 第41页 |
| 3.3.2 吉姆萨染色 | 第41页 |
| 3.3.3 免疫荧光染色 | 第41-42页 |
| 3.3.4 外显子测序 | 第42页 |
| 3.3.5 免疫沉淀(IP)结合质谱法检测CHEK1结合蛋白 | 第42-43页 |
| 3.3.6 免疫共沉淀(Co-IP)验证CHEK1结合蛋白CEP170 | 第43-44页 |
| 3.3.7 IP法检测CHEK1对结合蛋白CEP170的磷酸化调控 | 第44页 |
| 3.4 结果和讨论 | 第44-47页 |
| 3.4.1 吉姆萨染色测定细胞多核率 | 第44-45页 |
| 3.4.2 纺锤体、赤道板宽度及中心体数的免疫荧光检测 | 第45-46页 |
| 3.4.3 外显子测序测定DNA拷贝数异常 | 第46-47页 |
| 3.4.4 免疫共沉淀(Co-IP)结合质谱法证实CHEK1结合并调控中心体蛋白CEP170 | 第47页 |
| 3.5 小结 | 第47-49页 |
| 第四章 CHEK1过表达促进破骨细胞分化及机制研究 | 第49-56页 |
| 4.1 前言 | 第49页 |
| 4.2 材料 | 第49-50页 |
| 4.2.1 细胞、试剂与抗体 | 第49-50页 |
| 4.2.2 实验器材 | 第50页 |
| 4.3 方法 | 第50-52页 |
| 4.3.1 构建CHEK1高表达的巨噬细胞RAW 264.7细胞株 | 第50-51页 |
| 4.3.2 诱导巨噬细胞破骨分化 | 第51-52页 |
| 4.3.3 Western Blot检测CHEK1对NFATC1蛋白质水平的调控 | 第52页 |
| 4.3.4 Co-IP法探索CHEK1与NFATC1之间的相互关系 | 第52页 |
| 4.3.5 Western Blot 比较破骨细胞与RAW 264.7细胞中CHEK1与NFATC1的表达量 | 第52页 |
| 4.3.6 拟合蛋白质互作图 | 第52页 |
| 4.4 结果和讨论 | 第52-55页 |
| 4.4.1 CHEK1过表达促进RAW 264.7细胞株破骨分化进程 | 第52-53页 |
| 4.4.2 CHEK1与破骨细胞分化进程的联系 | 第53-54页 |
| 4.4.3 CHEK1与破骨细胞标志蛋白NFATC1的联系 | 第54-55页 |
| 4.5 小结 | 第55-56页 |
| 第三部分 天然化合物单体修饰物对CHEK1介导的CIN及骨破坏的干预研究 | 第56-61页 |
| 1 前言 | 第56页 |
| 2 材枓 | 第56-57页 |
| 2.1 细胞、试剂与抗体 | 第56-57页 |
| 2.2 实验器材 | 第57页 |
| 3 方法 | 第57-58页 |
| 3.1 天然化合物单体修饰物LY2603618诱导MM细胞凋亡能力检测 | 第57页 |
| 3.2 WB法检测LY2603618对MM耐药株细胞抑制效果 | 第57页 |
| 3.3 WB及IF实验检测LY2603618对细胞分裂相关蛋白质水平及细胞分裂的调控 | 第57-58页 |
| 3.4 检测LY2603618调控破骨细胞分化及相关蛋白的能力 | 第58页 |
| 4 结果和讨论 | 第58-60页 |
| 4.1 天然化合物单体修饰物LY2603618诱导MM细胞及MM耐药株凋亡能力检测 | 第58页 |
| 4.2 WB及IF实验检测LY2603618对细胞分裂相关蛋白质水平及细胞分裂的调控 | 第58-59页 |
| 4.3 检测LY2603618调控破骨细胞分化及相关蛋白的能力 | 第59-60页 |
| 5 小结 | 第60-61页 |
| 全文总结与展望 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-66页 |
| 文献综述 CHEK1引起多发性骨髓瘤细胞染色体不稳定和调控骨髓微环境的研究进展 | 第66-88页 |
| 参考文献 | 第78-88页 |
| 附录 | 第88-90页 |
| 读博士学位期间取得的研究成果 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 作者简介 | 第92页 |
