| 中文摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 前言 | 第11-14页 |
| 实验材料与方法 | 第14-44页 |
| 一 子宫内膜癌组织中GNA14蛋白的表达情况 | 第14-18页 |
| 1.1 实验方法 | 第14页 |
| 1.2 实验材料 | 第14-16页 |
| 1.2.1 实验标本 | 第14-15页 |
| 1.2.2 主要试剂 | 第15页 |
| 1.2.3 实验工具及仪器(见表1) | 第15-16页 |
| 1.3 实验步骤 | 第16-18页 |
| 1.3.1 石蜡标本的制备 | 第16-17页 |
| 1.3.2 HE的染色 | 第17页 |
| 1.3.3 免疫组织化的染色 | 第17-18页 |
| 1.3.4 免疫组化对照 | 第18页 |
| 1.3.5 结果判定 | 第18页 |
| 1.3.6 统计分析 | 第18页 |
| 二 GNA14在HEC-1A及Ishikawa细胞中mRNA的表达 | 第18-21页 |
| 2.1 实验方法 | 第18-19页 |
| 2.2 实验材料 | 第19-20页 |
| 2.2.1 细胞来源和培养 | 第19页 |
| 2.2.2 引物信息(见表2) | 第19页 |
| 2.2.3 主要试剂(见表3) | 第19-20页 |
| 2.2.4 主要仪器(表4) | 第20页 |
| 2.3 实验步骤 | 第20-21页 |
| 2.3.1 总RNA抽提 | 第20页 |
| 2.3.2 反转录反应 | 第20-21页 |
| 三 慢病毒介导的GNA14shRNA干扰载体的构建及细胞转染 | 第21-31页 |
| 3.1 试验方法 | 第21-22页 |
| 3.2 实验材料 | 第22-23页 |
| 3.2.1 实验质粒 | 第22-23页 |
| 3.2.2 实验菌株 | 第23页 |
| 3.3 实验试剂及实验仪器 | 第23-24页 |
| 3.3.1 酶类试剂(见表7) | 第23页 |
| 3.3.2 其他试剂(见表8) | 第23-24页 |
| 3.3.3 实验仪器(见表9) | 第24页 |
| 3.4 实验步骤 | 第24-31页 |
| 3.4.1 配置相关实验试剂 | 第24-25页 |
| 3.4.2 RNA干扰靶点设计及双链DNAoligo制备 | 第25-26页 |
| 3.4.3 RNA干扰慢病毒载体的构建 | 第26-27页 |
| 3.4.4 PCR鉴定阳性克隆产物 | 第27-29页 |
| 3.4.5 质粒抽提 | 第29-30页 |
| 3.4.6 病毒包装 | 第30页 |
| 3.4.7 准备目的细胞 | 第30-31页 |
| 3.4.8 目的细胞慢病毒感染 | 第31页 |
| 四 RNA干扰对HEC-1A及Ishikawa中GNA14敲减效率验证 | 第31-35页 |
| 4.1 实验方法 | 第31页 |
| 4.1.1 qRT-PCR | 第31页 |
| 4.1.2 蛋白免疫印迹 | 第31页 |
| 4.2 实验材料 | 第31-32页 |
| 4.2.1 主要试剂(见表18) | 第31-32页 |
| 4.2.2 主要仪器(见表19) | 第32页 |
| 4.3 实验步骤 | 第32-35页 |
| 4.3.1 Real-timequantitativePCR实验 | 第33-34页 |
| 4.3.2 Westernblotting实验 | 第34-35页 |
| 五 RNA干扰对HEC-1A及Ishikawa细胞中增殖凋亡的研究 | 第35-44页 |
| 5.1 实验方法 | 第35-37页 |
| 5.1.1 细胞增殖检测 | 第35-36页 |
| 5.1.1.1 高内涵细胞计数(Celigo) | 第35-36页 |
| 5.1.1.2 CCK8 | 第36页 |
| 5.1.2 细胞凋亡检测 | 第36-37页 |
| 5.1.3 流式细胞单染检测细胞周期 | 第37页 |
| 5.1.4 有关诱导细胞凋亡信号通路的研究 | 第37页 |
| 5.2 实验材料 | 第37-39页 |
| 5.2.1 主要试剂及仪器(见表23、24) | 第37-39页 |
| 5.3 实验步骤 | 第39-44页 |
| 5.3.1 GNA14对子宫内膜癌细胞增殖的影响 | 第39页 |
| 5.3.2 GNA14对子宫内膜癌细胞凋亡的影响 | 第39-40页 |
| 5.3.3 GNA14对子宫内膜癌细胞周期的影响 | 第40-41页 |
| 5.3.4 有关诱导细胞凋亡信号通路的研究 | 第41-44页 |
| 实验结果 | 第44-55页 |
| 1 子宫内膜癌组织中GNA14蛋白的表达情况 | 第44-45页 |
| 1.1 GNA14在子宫内膜癌组织中的表达水平高于正常组织 | 第44-45页 |
| 2 GNA14在HEC-1A及Ishikawa细胞中mRNA的表达 | 第45-46页 |
| 2.1 GNA14在子宫内膜癌细胞中呈高表达 | 第45-46页 |
| 3 慢病毒介导的GNA14shRNA干扰载体的构建及细胞转染 | 第46-47页 |
| 3.1 GNA14干扰慢病毒可以高效率感染子宫内膜癌细胞系且不影响细胞的状态 | 第46-47页 |
| 4 RNA干扰对HEC-1A及Ishikawa中GNA14敲减效率验证 | 第47-48页 |
| 4.1 慢病毒介导的RNA干扰技术可有效地敲低子宫内膜癌细胞中的GNA14基因 | 第47-48页 |
| 5 RNA干扰对HEC-1A及Ishikawa细胞中增殖凋亡的研究 | 第48-55页 |
| 5.1 下调GNA14的表达可以抑制子宫内膜癌细胞增殖 | 第48-50页 |
| 5.2 下调GNA14的表达可以促进子宫内膜癌细胞凋亡 | 第50-52页 |
| 5.3 下调GNA14的表达导致子宫内膜癌细胞周期紊乱 | 第52-53页 |
| 5.4 干扰GNA14通过激活Fas/FasL信号通路诱导细胞凋亡 | 第53-55页 |
| 讨论 | 第55-60页 |
| 展望 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 综述一 G蛋白在子宫内膜癌中的研究进展 | 第67-78页 |
| 参考文献 | 第75-78页 |
| 综述二 G蛋白在临床中的研究进展 | 第78-91页 |
| 参考文献 | 第85-91页 |
| 在学期间的研究成果 | 第91-92页 |
| 致谢 | 第92页 |
