| 中文摘要 | 第7-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 缩略语 | 第14-16页 |
| 第一部分 槐定碱类衍生物IMB-6G通过自噬-溶酶体途径抗胰腺癌作用及机制研究 | 第16-56页 |
| 1.1 前言 | 第16-20页 |
| 1.2 实验材料与仪器 | 第20-22页 |
| 1.2.1 化合物及其来源 | 第20页 |
| 1.2.2 细胞株与质粒 | 第20页 |
| 1.2.3 主要生化试剂 | 第20-21页 |
| 1.2.4 抗体 | 第21页 |
| 1.2.5 抑制剂及试剂盒 | 第21页 |
| 1.2.6 主要实验仪器 | 第21-22页 |
| 1.3 主要试剂的配制 | 第22-23页 |
| 1.3.1 M2细胞裂解液 | 第22页 |
| 1.3.2 10×PBS | 第22页 |
| 1.3.3 5×SDS上样缓冲液 | 第22页 |
| 1.3.4 10×转膜缓冲液 | 第22页 |
| 1.3.5 10×Tris-甘氨酸电泳缓冲液 | 第22页 |
| 1.3.6 10×TBS-T | 第22页 |
| 1.3.7 10%SDS | 第22页 |
| 1.3.8 50×TAE | 第22页 |
| 1.3.9 1×TE buffer | 第22-23页 |
| 1.4 实验方法 | 第23-31页 |
| 1.4.1 细胞培养 | 第23页 |
| 1.4.2 细胞冻存 | 第23页 |
| 1.4.3 细胞复苏 | 第23页 |
| 1.4.4 Bradford法测蛋白浓度 | 第23-24页 |
| 1.4.5 质粒转化 | 第24页 |
| 1.4.6 细胞活性检测 | 第24页 |
| 1.4.7 细胞凋亡检测 | 第24-25页 |
| 1.4.8 蛋白免疫印迹 | 第25页 |
| 1.4.9 菌种保存 | 第25-26页 |
| 1.4.10 质粒提取 | 第26页 |
| 1.4.11 质粒转染 | 第26-27页 |
| 1.4.12 小干扰RNA的转染: | 第27页 |
| 1.4.13 GFP-LC3聚集分布实验 | 第27页 |
| 1.4.14 LC3 Turnover实验 | 第27-28页 |
| 1.4.15 mCherry-GFP-LC3溶酶体呈递实验 | 第28页 |
| 1.4.16 溶酶体染色 | 第28页 |
| 1.4.17 DQ-BSA染色 | 第28-29页 |
| 1.4.18 AO染色 | 第29页 |
| 1.4.19 Cathepsin活性测定 | 第29页 |
| 1.4.20 溶酶体分离 | 第29-30页 |
| 1.4.21 数据分析 | 第30-31页 |
| 1.5 实验结果 | 第31-44页 |
| 1.5.1 IMB-6G对肿瘤细胞的选择性杀伤作用 | 第31页 |
| 1.5.2 IMB-6G对人胰腺癌细胞生长及凋亡的影响 | 第31-32页 |
| 1.5.3 IMB-6G对胰腺癌细胞内自噬水平的影响 | 第32-35页 |
| 1.5.4 IMB-6G对胰腺癌细胞自噬流的影响 | 第35-37页 |
| 1.5.5 IMB-6G抑制溶酶体内水解酶cathepsin蛋白的活性 | 第37-39页 |
| 1.5.6 IMB-6G诱导自噬依赖性溶酶体膜透化作用(LMP) | 第39-40页 |
| 1.5.7 IMB-6G自噬依赖性诱导cathepsin从溶酶体释放到细胞质中 | 第40-41页 |
| 1.5.8 自噬体和cathepsin参与IMB-6G诱导的胰腺癌细胞凋亡 | 第41-43页 |
| 1.5.9 IMB-6G抗胰腺癌作用机制示意图 | 第43-44页 |
| 1.6 讨论 | 第44-46页 |
| 1.7 结论 | 第46-47页 |
| 1.8 参考文献 | 第47-56页 |
| 第二部分 酯蟾毒配基Rsibufogenin通过激活PKC抑制GSK-3-NF-κB途径抗胰腺癌作用机制研究 | 第56-93页 |
| 2.1 前言 | 第56-60页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第60-61页 |
| 2.2.1 化合物及其来源 | 第60页 |
| 2.2.2 主要生化试剂 | 第60页 |
| 2.2.3 细胞系及质粒 | 第60页 |
| 2.2.4 抗体 | 第60-61页 |
| 2.2.5 抑制剂及试剂盒 | 第61页 |
| 2.2.6 主要实验仪器 | 第61页 |
| 2.3 实验方法 | 第61-65页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第61页 |
| 2.3.2 小干扰RNA的转染 | 第61页 |
| 2.3.3 Hochest染色实验 | 第61-62页 |
| 2.3.4 克隆形成实验 | 第62页 |
| 2.3.5 双荧光素酶报告基因分析 | 第62页 |
| 2.3.6 总RNA的提取和逆转录 | 第62-63页 |
| 2.3.7 RT-PCR | 第63页 |
| 2.3.8 DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第63页 |
| 2.3.9 细胞质和细胞核的分离 | 第63页 |
| 2.3.10 蛋白免疫印迹 | 第63-64页 |
| 2.3.11 基因芯片分析 | 第64页 |
| 2.3.12 裸鼠肿瘤移植实验 | 第64页 |
| 2.3.13 数据分析 | 第64-65页 |
| 2.4 实验结果 | 第65-80页 |
| 2.4.1 RB对胰腺癌细胞增殖活性的影响 | 第65-66页 |
| 2.4.2 RB诱导胰腺癌细胞发生caspase依赖性的细胞凋亡 | 第66-68页 |
| 2.4.3 RB通过抑制NF-κB信号通路诱导胰腺癌细胞凋亡 | 第68-70页 |
| 2.4.4 RB对人胰腺癌基因表达的影响 | 第70页 |
| 2.4.5 RB通过抑制TAK1的活性诱导NF-κB失活 | 第70-73页 |
| 2.4.6 RB抑制胰腺癌细胞中GSK-3的活性 | 第73-75页 |
| 2.4.7 RB诱导PKC依赖的GSK-3磷酸化失活 | 第75-77页 |
| 2.4.8 RB抑制无胸腺裸鼠中的人胰腺移植瘤模型生长 | 第77-80页 |
| 2.5 讨论 | 第80-82页 |
| 2.6 结论 | 第82-83页 |
| 2.7 参考文献 | 第83-93页 |
| 全文创新点 | 第93-94页 |
| 文献综述 | 第94-110页 |
| 参考文献 | 第101-110页 |
| 个人简历 | 第110-113页 |
| 附录 | 第113-121页 |
| 致谢 | 第121-122页 |
