| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 综述 | 第12-24页 |
| 1.1 辅酶A简介 | 第12-15页 |
| 1.2 辅酶A的传统生物合成途径 | 第15-18页 |
| 1.3 酿酒酵母中的辅酶A生物合成途径 | 第18-20页 |
| 1.4 磷酸泛酰半胱氨酸合成酶(PPCS)研究进展 | 第20-24页 |
| 第2章 蛋白的表达与纯化 | 第24-36页 |
| 2.1 实验试剂 | 第24-25页 |
| 2.2 酿酒酵母Cab2的基因 | 第25-26页 |
| 2.3 酿酒酵母CAB2基因的获取 | 第26-27页 |
| 2.4 Cab2-p28a重组质粒的构建 | 第27-28页 |
| 2.5 Cab2-p28a重组质粒的鉴定 | 第28-29页 |
| 2.6 Cab2突变体质粒的构建 | 第29-30页 |
| 2.7 相关蛋白的质粒构建 | 第30-31页 |
| 2.8 重组蛋白的表达 | 第31页 |
| 2.9 表达过程的优化 | 第31页 |
| 2.10 重组蛋白的纯化 | 第31-34页 |
| 2.11 重组蛋白的进一步处理与保存 | 第34-36页 |
| 第3章 Cab2及其突变体与底物产物复合物晶体结构解析 | 第36-92页 |
| 3.1 结晶试剂 | 第36页 |
| 3.2 晶体生长条件的初筛与优化 | 第36-40页 |
| 3.3 衍射数据的收集 | 第40-43页 |
| 3.4 衍射数据处理 | 第43-48页 |
| 3.5 Cab2相关晶体结构的解析与模型修正 | 第48-52页 |
| 3.6 晶体结构模型质量检验分析 | 第52-64页 |
| 3.7 晶体结构模型中缺失部分的鉴定 | 第64-67页 |
| 3.8 Cab2与Cab2_(H337A)晶体结构比较分析 | 第67-73页 |
| 3.9 Cab2整体结构及保守性分析 | 第73-78页 |
| 3.10 酿酒酵母Cab2中PPA、PMT及PPC的结合位点 | 第78-81页 |
| 3.11 Cab2与其它结构已解析PPCS的结构比对 | 第81-88页 |
| 3.12 Cab2与不同配体复合物结构中活性口袋残基及配体的构象变化 | 第88-92页 |
| 第4章 Cab2蛋白相关生化功能研究 | 第92-102页 |
| 4.1 底物PPA及CTP/ATP与Cab2的亲和力测定 | 第92-94页 |
| 4.2 底物PPA与Cab2各突变体的亲和力测定 | 第94-95页 |
| 4.3 Cab2对金属离子选择性 | 第95-97页 |
| 4.4 Cab2对ATP/CTP选择性 | 第97-98页 |
| 4.5 Cab2对半胱氨酸/胱氨酸/丝氨酸选择性 | 第98-99页 |
| 4.6 突变体酶活性测定 | 第99-102页 |
| 第5章 酿酒酵母Cab2催化机制 | 第102-110页 |
| 5.1 推测Cab2中CTP/ATP可能的结合位点 | 第102-104页 |
| 5.2 Lys226残基的ε-氨基可能发挥质子供体的作用 | 第104-105页 |
| 5.3 Cab2可能的催化机制 | 第105-110页 |
| 第6章 酿酒酵母辅酶A合成途径中其它酶的研究 | 第110-114页 |
| 6.1 大肠杆菌表达体系中重组蛋白的表达 | 第110-111页 |
| 6.2 毕赤酵母表达体系中重组蛋白的表达 | 第111页 |
| 6.3 GST-pulldown实验 | 第111-114页 |
| 小结 | 第114-116页 |
| 参考文献 | 第116-124页 |
| 附录 | 第124-173页 |
| 致谢 | 第173-174页 |
| 在读期间发表的学术论文及参加的学术会议 | 第174页 |
