| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-25页 |
| ·引言 | 第11页 |
| ·异养硝化微生物的分子生物学研究 | 第11-12页 |
| ·异养硝化细菌的氨单加氧酶（Ammonia monooxygenase，AMO） | 第11-12页 |
| ·异养硝化细菌的羟胺氧化酶（Hydroxylamine oxidase，HAO） | 第12页 |
| ·绿色荧光蛋白研究进展 | 第12-16页 |
| ·GFP 的简介 | 第13-14页 |
| ·GFP 应用研究进展 | 第14-16页 |
| ·特定蛋白质的标记 | 第14页 |
| ·对细胞谱系标记 | 第14-15页 |
| ·GFP 在研究开放环境中微生物的应用 | 第15页 |
| ·基因表达 | 第15-16页 |
| ·荧光蛋白的标记方式 | 第16-18页 |
| ·质粒标记 | 第16页 |
| ·同源重组标记 | 第16-17页 |
| ·转座重组标记 | 第17-18页 |
| ·实验研究背景及意义 | 第18-19页 |
| ·实验内容及创新点 | 第19-20页 |
| 参考文献 | 第20-25页 |
| 第二章 一株异养型硝化细菌的分离、鉴定及其硝化特性的研究 | 第25-45页 |
| 前言 | 第25-26页 |
| ·材料与方法 | 第26-33页 |
| ·分离源 | 第26页 |
| ·生化试剂 | 第26页 |
| ·化学药品 | 第26-27页 |
| ·主要试剂 | 第27-28页 |
| ·主要仪器设备 | 第28-29页 |
| ·培养基 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-33页 |
| ·异养型硝化细菌的富集培养和分离纯化 | 第29-30页 |
| ·形态结构观察及生理生化实验 | 第30-31页 |
| ·16S rDNA 的PCR 扩增和序列测定 | 第31页 |
| ·序列比对和基于16S rDNA 的系统发育分析 | 第31-32页 |
| ·亚硝酸盐含量的测定----N-（1-萘基）-乙二胺光度法 | 第32页 |
| ·硝酸盐含量的测定（紫外分光光度法） | 第32页 |
| ·环境条件对菌株LYS-86 硝化作用的影响 | 第32-33页 |
| ·结果与讨论 | 第33-43页 |
| ·亚硝酸盐标准曲线的制作 | 第33-34页 |
| ·硝酸盐标准曲线的制作 | 第34页 |
| ·异养型硝化细菌的分离 | 第34页 |
| ·异养型硝化细菌硝化功能的鉴定 | 第34-35页 |
| ·形态结构观察及生理生化实验 | 第35-36页 |
| ·序列比对和基于16S rDNA 的系统发育分析 | 第36-39页 |
| ·环境条件对菌株LYS-86 硝化作用的影响 | 第39-43页 |
| ·pH 对菌株LYS-86 硝化作用的影响 | 第39-40页 |
| ·温度对菌株LYS-86 硝化作用的影响 | 第40-41页 |
| ·转速对菌株LYS-86 硝化作用的影响 | 第41-42页 |
| ·初始亚硝基氮浓度对菌株LYS-86 硝化作用的影响 | 第42页 |
| ·盐浓度对菌株LYS-86 硝化作用的影响 | 第42-43页 |
| ·分析总结 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-45页 |
| 第三章 绿色荧光蛋白基因(GFP)标记异养型硝化菌株LYS-86 的研究 | 第45-68页 |
| 前言 | 第45-46页 |
| ·实验材料 | 第46-49页 |
| ·菌种和质粒 | 第46页 |
| ·培养基 | 第46-47页 |
| ·实验试剂 | 第47-48页 |
| ·实验仪器 | 第48-49页 |
| ·PCR 引物 | 第49页 |
| ·实验方法 | 第49-54页 |
| ·试剂盒快速小量提取质粒DNA | 第49-50页 |
| ·基因组DNA 分离提取 | 第50页 |
| ·凝胶回收纯化DNA | 第50-51页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第51页 |
| ·转化大肠杆菌感受态细胞 | 第51-52页 |
| ·去磷酸化处理 | 第52页 |
| ·连接反应 | 第52-53页 |
| ·酶切反应 | 第53页 |
| ·PCR 扩增 | 第53页 |
| ·双亲本滤膜接合转座 | 第53-54页 |
| ·实验结果与分析 | 第54-66页 |
| ·自杀性重组载体pUT/mini-Tn5-km2-GFP 的构建流程 | 第54-56页 |
| ·Plac-EGFP 基因片段的获得 | 第56页 |
| ·pMD19-T- Plac-EGFP 重组质粒的构建 | 第56-59页 |
| ·pUT/mini-Tn5-Km2-GFP 重组自杀性质粒的构建 | 第59-64页 |
| ·绿色荧光蛋白基因GFP 染色体标记菌株LYS-86 | 第64-66页 |
| ·分析总结 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-68页 |
| 第四章 Pseudomonas putida xyz 氨单加氧酶基因（amoA）的克隆 | 第68-82页 |
| 前言 | 第68页 |
| ·实验材料 | 第68-71页 |
| ·菌种和质粒 | 第68-69页 |
| ·培养基 | 第69页 |
| ·生物化学试剂，酶及试剂盒 | 第69页 |
| ·抗生素 | 第69-70页 |
| ·PCR 引物 | 第70-71页 |
| ·菌株Pseudomonas putida xyz amoA 基因的判定引物 | 第70-71页 |
| ·菌株Pseudomonas putida xyz amoA 全长基因的PCR 扩增引物 | 第71页 |
| ·分子生物学相关操作 | 第71-73页 |
| ·基因组DNA 分离提取 | 第71页 |
| ·碱裂解法小量提取质粒DNA | 第71页 |
| ·凝胶回收纯化 | 第71页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第71页 |
| ·转化大肠杆菌感受态细胞 | 第71-72页 |
| ·连接反应 | 第72页 |
| ·PCR 扩增 | 第72-73页 |
| ·实验结果与分析 | 第73-79页 |
| ·amoA 部分基因片段的克隆 | 第73-76页 |
| ·amoA 全长基因片段的克隆 | 第76-79页 |
| ·分析总结 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-82页 |
| 第五章 实验总结与展望 | 第82-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 研究生阶段发表论文情况 | 第85页 |
