摘要 | 第7-9页 |
Abstract | 第9-10页 |
1 前言 | 第11-21页 |
1.1 化感作用的根际生物学特性 | 第11-14页 |
1.1.1 根际土壤微生物对化感物质的作用 | 第12-13页 |
1.1.2 化感物质对根际土壤微生物的影响 | 第13-14页 |
1.2 粘细菌的多细胞群体行为概述 | 第14-18页 |
1.2.1 粘细菌滑动运动的模式与机制 | 第14-16页 |
1.2.2 粘细菌的群体捕食行为 | 第16-17页 |
1.2.3 粘细菌的多细胞子实体发育过程 | 第17-18页 |
1.3 稳定同位素标记的蛋白质组相对定量方法概述 | 第18-19页 |
1.4 本研究的目的与科学意义 | 第19-21页 |
2 试验材料 | 第21-22页 |
2.1 供试材料 | 第21页 |
2.2 主要试剂与试剂盒 | 第21页 |
2.3 实验设备 | 第21-22页 |
3 试验方法 | 第22-27页 |
3.1 不同根系浸提液的生物测试及粘球菌的数量测定 | 第22-24页 |
3.1.1 供试水稻品种根系浸提液的制备 | 第22页 |
3.1.2 化感水稻根际黄色粘球菌的培养 | 第22-23页 |
3.1.3 不同化感潜力水稻品种根系浸提液的生物测试 | 第23页 |
3.1.4 土壤微生物总DNA的提取与纯化 | 第23页 |
3.1.5 粘球菌属微生物qPCR标准曲线的建立 | 第23页 |
3.1.6 不同浸提液处理稗草体系下粘球菌的数量测定 | 第23页 |
3.1.7 数据处理 | 第23-24页 |
3.2 外源酚酸诱导下粘细菌的生长变化与酚酸利用率动态测定 | 第24页 |
3.2.1 外源酚酸类物质诱导下黄色粘球菌的生长变化 | 第24页 |
3.2.2 黄色粘球菌对酚酸类物质的利用率测定 | 第24页 |
3.3 阿魏酸诱导下黄色粘球菌的蛋白组学分析 | 第24-26页 |
3.3.1 化感水稻根际特异黄色粘球菌的培养方法 | 第24-25页 |
3.3.2 阿魏酸诱导下黄色粘球菌菌体全蛋白样品的制备 | 第25页 |
3.3.3 阿魏酸诱导下黄色粘球菌发酵液的浓缩与分泌蛋白样品的制备 | 第25页 |
3.3.4 蛋白样品的浓度测定 | 第25页 |
3.3.5 蛋白样品的聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)单向电泳检测 | 第25页 |
3.3.6 蛋白样品的酶解 | 第25页 |
3.3.7 肽段的二甲基化标记 | 第25页 |
3.3.8 二甲基化标记样品的除盐处理 | 第25页 |
3.3.9 高效液相色谱分离与质谱分析 | 第25页 |
3.3.10 数据库查询与蛋白质鉴定 | 第25-26页 |
3.4 阿魏酸诱导下黄色粘球菌部分重要差异蛋白的qPCR验证 | 第26-27页 |
3.4.1 RNA样品的制备 | 第26-27页 |
3.4.2 cDNA的合成 | 第27页 |
3.4.3 qPCR检测 | 第27页 |
4 结果与分析 | 第27-48页 |
4.1 不同根系浸提液的生物测试及粘球菌的数量测定结果 | 第27-32页 |
4.1.1 不同根系浸提液的生物测试结果 | 第27-30页 |
4.1.2 土壤微生物总DNA的提取与纯化 | 第30页 |
4.1.3 不同根系浸提液处理稗草体系下粘球菌的数量测定 | 第30-32页 |
4.2 酚酸诱导下粘细菌的生长变化与酚酸利用率 | 第32-35页 |
4.2.1 阿魏酸诱导下黄色粘球菌的生长变化与阿魏酸利用率 | 第32-33页 |
4.2.2 肉桂酸诱导下黄色粘球菌的生长变化与肉桂酸利用率 | 第33-35页 |
4.3 阿魏酸诱导下黄色粘球菌的蛋白组学分析 | 第35-44页 |
4.3.1 蛋白样品的1D-SDS-PAGE电泳检测 | 第35-36页 |
4.3.2 阿魏酸诱导下差异表达蛋白GO注释的聚类分析 | 第36-38页 |
4.3.3 不同浓度阿魏酸诱导下共同差异表达蛋白分析 | 第38-44页 |
4.4 阿魏酸诱导下黄色粘球菌部分关键差异蛋白的qPCR验证结果 | 第44-48页 |
4.4.1 RNA纯度和完整性检测结果 | 第44页 |
4.4.2 qRT-PCR扩增曲线与融解曲线分析 | 第44-45页 |
4.4.3 阿魏酸诱导下黄色粘球菌Frz家族各成员基因的差异表达分析 | 第45-46页 |
4.4.4 阿魏酸诱导下黄色粘球菌部分重要基因的差异表达分析 | 第46-48页 |
5 讨论 | 第48-55页 |
6 总结 | 第55-56页 |
7 问题与展望 | 第56-57页 |
参考文献 | 第57-64页 |
附录Ⅰ 黄色粘球菌菌体全蛋白的提取方法 | 第64页 |
附录Ⅱ 黄色粘球菌发酵液的浓缩与分泌蛋白样品的制备方法 | 第64页 |
附录Ⅲ 蛋白样品的酶解方法 | 第64-65页 |
附录Ⅳ 二甲基化标记的肽段样品的除盐方法 | 第65-66页 |
致谢 | 第66页 |