| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-18页 |
| 第一章 绪论 | 第18-26页 |
| ·HMGB1概述 | 第18-23页 |
| ·HMGB1的命名 | 第18页 |
| ·HMGB1的基因结构和分布 | 第18-19页 |
| ·HMGB1的生物学功能 | 第19-20页 |
| ·HMGB1释放的机制 | 第20页 |
| ·HMGB1的受体 | 第20页 |
| ·HMGB1与临床疾病的关系 | 第20-21页 |
| ·HMGB1在免疫系统中的作用 | 第21-22页 |
| ·有关HMGB1亟待解决的问题 | 第22-23页 |
| ·本研究的目的、方法、试验设计及研究意义 | 第23-26页 |
| ·研究目的 | 第23-24页 |
| ·研究方法 | 第24页 |
| ·本研究的意义 | 第24页 |
| ·试验设计 | 第24-26页 |
| 第二章 鼠HMGB1基因克隆及序列分析 | 第26-35页 |
| ·材料 | 第26-27页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26-27页 |
| ·主要溶液 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-31页 |
| ·感受态的制备 | 第27-28页 |
| ·引物设计及合成 | 第28页 |
| ·小鼠脾细胞分离 | 第28页 |
| ·总RNA的提取 | 第28-29页 |
| ·逆转录cDNA的合成 | 第29页 |
| ·PCR扩增鼠HMGB1基因 | 第29-30页 |
| ·T-A克隆及鉴定 | 第30-31页 |
| ·HMGB1基因序列测定及分析 | 第31页 |
| ·结果 | 第31-33页 |
| ·鼠HMGB1基因克隆 | 第31-32页 |
| ·测序结果 | 第32-33页 |
| ·讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 原核表达系统pET28-HMGB1的构建、蛋白表达以及多克隆抗体的制备 | 第35-45页 |
| ·材料 | 第35-37页 |
| ·试验菌株及质粒 | 第35页 |
| ·实验动物 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·主要溶液配制 | 第35-37页 |
| ·主要仪器 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-41页 |
| ·目的基因的纯化 | 第37页 |
| ·pET28载体的酶切 | 第37-38页 |
| ·目的基因与pET28载体的连接 | 第38-39页 |
| ·转化与鉴定 | 第39页 |
| ·蛋白的诱导 | 第39页 |
| ·目的蛋白的鉴定 | 第39页 |
| ·蛋白的纯化 | 第39-40页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第40页 |
| ·多克隆抗体的效价和特异性鉴定 | 第40-41页 |
| ·结果 | 第41-43页 |
| ·pET28-HMGB1原核表达载体的构建及鉴定 | 第41页 |
| ·鼠HMGB1融合蛋白的诱导表达及Western blot鉴定 | 第41-42页 |
| ·多克隆抗体的效价 | 第42-43页 |
| ·讨论 | 第43-45页 |
| 第四章 类风湿关节炎患者外周HMGB1的检测及其与RORγt、IL-17表达水平的相关性研究 | 第45-59页 |
| ·材料与方法 | 第45-46页 |
| ·主要仪器 | 第45页 |
| ·主要试剂 | 第45-46页 |
| ·方法 | 第46-52页 |
| ·标本收集 | 第46页 |
| ·PBMC分离和培养 | 第46-47页 |
| ·引物设计及合成 | 第47页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第47-49页 |
| ·目的基因标准质粒的构建 | 第49-52页 |
| ·统计学处理 | 第52页 |
| ·结果 | 第52-57页 |
| ·RA患者外周血HMGB1基因PCR扩增产物 | 第52-53页 |
| ·HMGB1、RORγt、IL-17、β-actin基因标准质粒QRT-PCR扩增 | 第53-54页 |
| ·RA患者和健康对照组间PBMC中HMGB1、RORγt、IL-17 mRNA表达水平的比较 | 第54页 |
| ·RA患者HMGB1、RORγt和IL-17 mRNA表达水平的相关性分析 | 第54-55页 |
| ·血浆HMGB1、IL-23和IL-17蛋白的检测结果及其与CRP、ESC和RF相关性分析 | 第55-56页 |
| ·RA患者外周血中CD3~+CD8~-IL17~+细胞比率流式分析结果 | 第56-57页 |
| ·讨论 | 第57-59页 |
| 第五章 HMGB1对Th17细胞调节作用的初步研究 | 第59-66页 |
| ·材料 | 第59页 |
| ·主要试剂 | 第59页 |
| ·主要溶液 | 第59页 |
| ·细胞培养 | 第59页 |
| ·动物 | 第59页 |
| ·方法 | 第59-61页 |
| ·小鼠T细胞细胞分选 | 第59-60页 |
| ·HMGB1对T细胞的诱导分化 | 第60页 |
| ·淋巴细胞IL-17的流式检测 | 第60-61页 |
| ·淋巴细胞的实时定量检测 | 第61页 |
| ·统计方法 | 第61页 |
| ·结果 | 第61-64页 |
| ·HMGB1刺激对Th17特异性转录因子和细胞因子mRNA表达的影响 | 第61-63页 |
| ·流式分析结果 | 第63-64页 |
| ·讨论 | 第64-66页 |
| 第六章 主要结论和展望 | 第66-68页 |
| ·主要结论 | 第66页 |
| ·展望 | 第66-68页 |
| 缩略词 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第77页 |
