摘要 | 第4-7页 |
Abstract | 第7-9页 |
第一章 乳腺癌发病机理的研究进展(文献综述) | 第13-24页 |
1 乳腺癌的分类 | 第13-14页 |
2 乳腺癌肿瘤异质性和变化 | 第14-15页 |
3 乳腺癌的转移 | 第15-17页 |
4 活性氧簇在乳腺癌进展中的作用 | 第17-18页 |
5 MARS基因在乳腺癌进展中的作用 | 第18-20页 |
6 细胞外基质在乳腺癌进展中的作用 | 第20-23页 |
7 RNA干扰技术在癌症治疗中的作用 | 第23-24页 |
第二章 乳腺癌临床样本中MARS基因表达情况的研究 | 第24-49页 |
1 引言 | 第24-26页 |
2 实验材料和方法 | 第26-36页 |
2.1 研究对象 | 第26页 |
2.2 实验仪器 | 第26-27页 |
2.3 实验试剂或试剂盒 | 第27页 |
2.4 实验方法 | 第27-36页 |
2.4.1 引物设计 | 第27-28页 |
2.4.2 乳腺癌和癌旁组织的总RNA的提取 | 第28-29页 |
2.4.3 cDNA第一条链的合成 | 第29页 |
2.4.4 MARS基因的实时荧光PCR定量 | 第29-30页 |
2.4.5 MARS蛋白表达的WesternBlot检测 | 第30-33页 |
2.4.6 MARS蛋白的免疫组织化学染色检测及统计 | 第33-34页 |
2.4.7 不同癌症中MARS基因表达水平的比较 | 第34-35页 |
2.4.8 统计分析方法 | 第35-36页 |
3.结果 | 第36-47页 |
3.1 乳腺癌组织中MARS基因的表达水平高于癌旁乳腺组织 | 第36-37页 |
3.2 MARS蛋白在乳定位于腺癌组织细胞质中且表达水平高于癌旁组织 | 第37-38页 |
3.3 MARS蛋白表达水平与乳腺癌患者临床病理特征的相关性分析 | 第38-40页 |
3.4 MARS蛋白高表达预示着乳腺癌患者预后不良 | 第40-42页 |
3.5 MARS基因的高表达对多种癌症患者生存率产生不利影响 | 第42-44页 |
3.6 MARS基因对乳腺癌患者生存率影响的分析 | 第44-45页 |
3.7 不同癌症组织和相应的癌旁组织间的MARS表水平式分析 | 第45-47页 |
4 讨论 | 第47-49页 |
第三章 干扰MARS基因的表达对MCF-7细胞EMT过程和迁移的影响 | 第49-63页 |
1 引言 | 第49-50页 |
2 实验材料和方法 | 第50-58页 |
2.1 细胞系 | 第50页 |
2.2 主要仪器 | 第50页 |
2.3 主要试剂 | 第50-51页 |
2.4 方法 | 第51-58页 |
2.4.1 siRNA的设计与合成 | 第51页 |
2.4.2 MCF-7细胞系的培养与转染 | 第51-52页 |
2.4.3 MARS基因的qRT-PCR检测 | 第52-53页 |
2.4.4 MARS蛋白表达的WesternBlot检测 | 第53-56页 |
2.4.5 qRT-PCR检测MARS低表达对MCF-7细胞EMT的影响 | 第56页 |
2.4.6 划痕损伤实验 | 第56-57页 |
2.4.7 统计分析方法 | 第57-58页 |
3 结果 | 第58-62页 |
3.1 siRNA可以有效降低MCF-7细胞MARS基因的转录水平 | 第58-59页 |
3.2 siRNA有效抑制了MARS蛋白的表达 | 第59页 |
3.3 下调MARS蛋白的表达抑制了MCF-7细胞的EMT过程 | 第59-60页 |
3.4 抑制MARS蛋白的表达降低了MCF-7细胞的迁移速率 | 第60-62页 |
4 讨论 | 第62-63页 |
第四章 乳腺癌ECM体外培养体系的构建及其对MCF-7细胞EMT和MARS基因表达影响的研究 | 第63-85页 |
1 引言 | 第63-65页 |
2 实验材料和方法 | 第65-76页 |
2.1 实验材料 | 第65页 |
2.2 主要仪器 | 第65页 |
2.3 主要试剂 | 第65-66页 |
2.4 实验方法 | 第66-76页 |
2.4.1 乳腺癌组织去细胞操作 | 第66页 |
2.4.2 去细胞ECM支架的DNA残留分析与定量 | 第66-67页 |
2.4.3 乳腺癌去细胞ECM支架染色 | 第67-69页 |
2.4.4 乳腺癌ECM支架胶原蛋白的免疫荧光分析 | 第69-70页 |
2.4.5 ECM成分定量分析 | 第70-71页 |
2.4.6 乳腺癌ECM支架的再细胞化 | 第71-72页 |
2.4.7 再细胞化ECM支架的HE染色 | 第72页 |
2.4.8 再细胞化ECM支架的总RNA提取和实时定量PCR检测 | 第72-74页 |
2.4.9 再细胞化ECM支架的5-氟尿嘧啶处理及细胞流式分析 | 第74-75页 |
2.4.10 统计分析方法 | 第75-76页 |
3 结果 | 第76-84页 |
3.1 SLES溶液可以有效去除乳腺癌组织中的细胞 | 第76-77页 |
3.2 去细胞ECM支架主要成分特异性染色 | 第77页 |
3.3 去细胞ECM支架中胶原蛋白的残留情况有差异 | 第77-78页 |
3.4 去细胞ECM支架中ECM组分的定量 | 第78-80页 |
3.5 去细胞ECM支架可以体外支持MCF-7细胞的增殖 | 第80页 |
3.6 再细胞化ECM支架增加MARS基因的表达 | 第80-81页 |
3.7 再细胞化ECM支架促进EMT过程 | 第81-82页 |
3.8 再细胞化ECM支架增强MCF-7细胞的抗药能力 | 第82-84页 |
4 讨论 | 第84-85页 |
结论 | 第85-86页 |
参考文献 | 第86-100页 |
致谢 | 第100-101页 |
攻读学位期间发表的学术论文 | 第101页 |