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MARS基因表达水平与乳腺癌进展的相关性及乳腺癌体外培养模型的构建

摘要第4-7页
Abstract第7-9页
第一章 乳腺癌发病机理的研究进展(文献综述)第13-24页
    1 乳腺癌的分类第13-14页
    2 乳腺癌肿瘤异质性和变化第14-15页
    3 乳腺癌的转移第15-17页
    4 活性氧簇在乳腺癌进展中的作用第17-18页
    5 MARS基因在乳腺癌进展中的作用第18-20页
    6 细胞外基质在乳腺癌进展中的作用第20-23页
    7 RNA干扰技术在癌症治疗中的作用第23-24页
第二章 乳腺癌临床样本中MARS基因表达情况的研究第24-49页
    1 引言第24-26页
    2 实验材料和方法第26-36页
        2.1 研究对象第26页
        2.2 实验仪器第26-27页
        2.3 实验试剂或试剂盒第27页
        2.4 实验方法第27-36页
            2.4.1 引物设计第27-28页
            2.4.2 乳腺癌和癌旁组织的总RNA的提取第28-29页
            2.4.3 cDNA第一条链的合成第29页
            2.4.4 MARS基因的实时荧光PCR定量第29-30页
            2.4.5 MARS蛋白表达的WesternBlot检测第30-33页
            2.4.6 MARS蛋白的免疫组织化学染色检测及统计第33-34页
            2.4.7 不同癌症中MARS基因表达水平的比较第34-35页
            2.4.8 统计分析方法第35-36页
    3.结果第36-47页
        3.1 乳腺癌组织中MARS基因的表达水平高于癌旁乳腺组织第36-37页
        3.2 MARS蛋白在乳定位于腺癌组织细胞质中且表达水平高于癌旁组织第37-38页
        3.3 MARS蛋白表达水平与乳腺癌患者临床病理特征的相关性分析第38-40页
        3.4 MARS蛋白高表达预示着乳腺癌患者预后不良第40-42页
        3.5 MARS基因的高表达对多种癌症患者生存率产生不利影响第42-44页
        3.6 MARS基因对乳腺癌患者生存率影响的分析第44-45页
        3.7 不同癌症组织和相应的癌旁组织间的MARS表水平式分析第45-47页
    4 讨论第47-49页
第三章 干扰MARS基因的表达对MCF-7细胞EMT过程和迁移的影响第49-63页
    1 引言第49-50页
    2 实验材料和方法第50-58页
        2.1 细胞系第50页
        2.2 主要仪器第50页
        2.3 主要试剂第50-51页
        2.4 方法第51-58页
            2.4.1 siRNA的设计与合成第51页
            2.4.2 MCF-7细胞系的培养与转染第51-52页
            2.4.3 MARS基因的qRT-PCR检测第52-53页
            2.4.4 MARS蛋白表达的WesternBlot检测第53-56页
            2.4.5 qRT-PCR检测MARS低表达对MCF-7细胞EMT的影响第56页
            2.4.6 划痕损伤实验第56-57页
            2.4.7 统计分析方法第57-58页
    3 结果第58-62页
        3.1 siRNA可以有效降低MCF-7细胞MARS基因的转录水平第58-59页
        3.2 siRNA有效抑制了MARS蛋白的表达第59页
        3.3 下调MARS蛋白的表达抑制了MCF-7细胞的EMT过程第59-60页
        3.4 抑制MARS蛋白的表达降低了MCF-7细胞的迁移速率第60-62页
    4 讨论第62-63页
第四章 乳腺癌ECM体外培养体系的构建及其对MCF-7细胞EMT和MARS基因表达影响的研究第63-85页
    1 引言第63-65页
    2 实验材料和方法第65-76页
        2.1 实验材料第65页
        2.2 主要仪器第65页
        2.3 主要试剂第65-66页
        2.4 实验方法第66-76页
            2.4.1 乳腺癌组织去细胞操作第66页
            2.4.2 去细胞ECM支架的DNA残留分析与定量第66-67页
            2.4.3 乳腺癌去细胞ECM支架染色第67-69页
            2.4.4 乳腺癌ECM支架胶原蛋白的免疫荧光分析第69-70页
            2.4.5 ECM成分定量分析第70-71页
            2.4.6 乳腺癌ECM支架的再细胞化第71-72页
            2.4.7 再细胞化ECM支架的HE染色第72页
            2.4.8 再细胞化ECM支架的总RNA提取和实时定量PCR检测第72-74页
            2.4.9 再细胞化ECM支架的5-氟尿嘧啶处理及细胞流式分析第74-75页
            2.4.10 统计分析方法第75-76页
    3 结果第76-84页
        3.1 SLES溶液可以有效去除乳腺癌组织中的细胞第76-77页
        3.2 去细胞ECM支架主要成分特异性染色第77页
        3.3 去细胞ECM支架中胶原蛋白的残留情况有差异第77-78页
        3.4 去细胞ECM支架中ECM组分的定量第78-80页
        3.5 去细胞ECM支架可以体外支持MCF-7细胞的增殖第80页
        3.6 再细胞化ECM支架增加MARS基因的表达第80-81页
        3.7 再细胞化ECM支架促进EMT过程第81-82页
        3.8 再细胞化ECM支架增强MCF-7细胞的抗药能力第82-84页
    4 讨论第84-85页
结论第85-86页
参考文献第86-100页
致谢第100-101页
攻读学位期间发表的学术论文第101页

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