| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第11-24页 |
| 1.1 绿色荧光蛋白的论述 | 第11-14页 |
| 1.1.1 绿色荧光蛋白的发展进程 | 第11页 |
| 1.1.2 绿色荧光蛋白的三维结构与发光机制 | 第11-13页 |
| 1.1.3 绿色荧光蛋白的性质及其应用 | 第13-14页 |
| 1.2 基于split GFP的荧光互补技术的介绍和应用 | 第14-20页 |
| 1.2.1 基于split GFP的荧光互补技术发展与简介 | 第14-15页 |
| 1.2.2 基于GFP1-10/GFP11双分子荧光互补技术的研究和应用 | 第15-17页 |
| 1.2.3 基于GFP1-9/GFP10-11双分子荧光互补技术的研究和应用 | 第17-18页 |
| 1.2.4 基于GFP1-9/GFP10/GFP11三分子荧光互补技术的研究和应用 | 第18-20页 |
| 1.3 转肽酶的生物学功能及其检测 | 第20-23页 |
| 1.3.1 转肽酶SrtA催化的转肽反应 | 第21页 |
| 1.3.2 转肽酶SrtA活性的检测及其抑制剂的筛选 | 第21-23页 |
| 1.4 本文构思 | 第23-24页 |
| 第2章 三分裂split GFP体系的构建及优化 | 第24-34页 |
| 2.1 前言 | 第24-25页 |
| 2.2 实验材料 | 第25-26页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第25页 |
| 2.2.2 实验材料试剂 | 第25页 |
| 2.2.3 培养基的配制 | 第25-26页 |
| 2.2.4 缓冲溶液的配制 | 第26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-28页 |
| 2.3.1 蛋白质的表达纯化以及表达过程中实验条件的优化 | 第26-28页 |
| 2.3.2 GFP1-9与GFP10-11的复合反应实验条件的优化 | 第28页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第28-33页 |
| 2.4.1 GFP1-9大片段蛋白的表达纯化以及表达过程中实验条件的优化 | 第28-32页 |
| 2.4.2 GFP1-9与GFP10-11的复合反应实验条件的优化 | 第32-33页 |
| 2.5 本章小结 | 第33-34页 |
| 第3章 转肽反应介导的三分子split GFP互补体系用于转肽酶活性的免标记检测 | 第34-52页 |
| 3.1 前言 | 第34-35页 |
| 3.2 实验材料 | 第35-37页 |
| 3.2.1 实验仪器 | 第35-36页 |
| 3.2.2 实验材料与试剂 | 第36页 |
| 3.2.3 培养基的配制 | 第36页 |
| 3.2.4 缓冲液的配制 | 第36-37页 |
| 3.3 实验方法 | 第37-39页 |
| 3.3.1 转肽酶SrtA的诱导表达与纯化 | 第37页 |
| 3.3.2 GFP1-9与GFP10-11多肽片段的复合及SrtA活性的验证 | 第37-38页 |
| 3.3.3 基于三分子split GFP荧光互补体系的SrtA活性及抑制剂的检测 | 第38页 |
| 3.3.4 SrtA酶活的特异性检测及其在人血清中的分析 | 第38页 |
| 3.3.5 基于三分子split GFP荧光互补体系对金黄色葡萄球菌进行检测 | 第38-39页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第39-51页 |
| 3.4.1 转肽酶SrtA的诱导表达及其酶活性验证 | 第39-40页 |
| 3.4.2 三分子split GFP体系检测转肽酶活性的原理及可行性验证 | 第40-42页 |
| 3.4.3 实验条件的优化 | 第42-44页 |
| 3.4.4 检测转肽酶SrtA的活性 | 第44页 |
| 3.4.5 SrtA的抑制剂实验 | 第44-47页 |
| 3.4.6 SrtA的选择性及其在人血清中的检测 | 第47-48页 |
| 3.4.7 基于三分子split GFP荧光互补体系对金黄色葡萄球菌进行检测 | 第48-51页 |
| 3.5 本章小结 | 第51-52页 |
| 第4章 Split GFP细胞膜上体系的构建 | 第52-58页 |
| 4.1 前言 | 第52页 |
| 4.2 实验材料 | 第52-53页 |
| 4.2.1 实验仪器 | 第52-53页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第53页 |
| 4.3 实验方法 | 第53-55页 |
| 4.3.1 pDisplay-gfp,pDisplay-gfp1-10载体质粒的构建 | 第53-54页 |
| 4.3.2 实验细胞培养 | 第54页 |
| 4.3.3 细胞转染实验 | 第54页 |
| 4.3.4 免疫荧光实验 | 第54页 |
| 4.3.5 膜外复合成像实验 | 第54-55页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第55-57页 |
| 4.4.1 pDisplay-gfp和pDisplaygfp1-10质粒的构建 | 第55页 |
| 4.4.2 异源蛋白膜外定位的成像验证实验 | 第55-56页 |
| 4.4.3 GFP1-10与GFP11在细胞膜外的复合实验 | 第56-57页 |
| 4.5 本章小结 | 第57-58页 |
| 总结 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 附录A 攻读学位期间所发表的学术论文目录 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
