| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-35页 |
| 1.1 致倦库蚊 | 第14-16页 |
| 1.1.1 由蚊虫导致的医疗问题 | 第14-15页 |
| 1.1.2 蚊虫的防治 | 第15页 |
| 1.1.3 蚊虫抗药性现状 | 第15-16页 |
| 1.2 拟除虫菊酯类杀虫剂 | 第16-17页 |
| 1.3 细胞色素P450介导的杀虫剂代谢抗药性机制 | 第17-27页 |
| 1.3.1 细胞色素P450多功能氧化酶简介 | 第18-19页 |
| 1.3.2 PBO增效实验 | 第19-20页 |
| 1.3.3 P450基因的过量表达 | 第20-22页 |
| 1.3.4 P450基因在发育阶段和组织表达的特异性 | 第22页 |
| 1.3.5 P450的诱导表达 | 第22-23页 |
| 1.3.6 P450基因的功能研究(RNAi and transgenic assay) | 第23-24页 |
| 1.3.7 P450s对杀虫剂的代谢 | 第24-26页 |
| 1.3.8 细胞色素P450还原酶和细胞色素b5 | 第26-27页 |
| 1.4 羧酸酯酶介导的杀虫剂代谢抗性机制 | 第27-29页 |
| 1.5 杆状病毒表达系统 | 第29-33页 |
| 1.5.1 概述 | 第29-30页 |
| 1.5.2 杆状病毒 | 第30-31页 |
| 1.5.3 杆状病毒表达系统 | 第31-33页 |
| 1.6 本文研究的目的和内容 | 第33-35页 |
| 第二章 苄氯菊酯对致倦库蚊P450基因的诱导表达 | 第35-46页 |
| 2.1 材料和方法 | 第35-39页 |
| 2.1.1 供试致倦库蚊 | 第35-36页 |
| 2.1.2 苄氯菊酯处理 | 第36页 |
| 2.1.3 RNA提取和cDNA的合成 | 第36页 |
| 2.1.4 荧光定量PCR (qRT-PCR) | 第36-37页 |
| 2.1.5 数据分析 | 第37-39页 |
| 2.2 结果与分析 | 第39-44页 |
| 2.2.1 HAmCq~(G8)种群中P450基因的诱导表达 | 第39-40页 |
| 2.2.2 MAmCq~(G8)种群中P450基因的诱导表达 | 第40-44页 |
| 2.3 讨论 | 第44-46页 |
| 第三章 P450与细胞色素P450氧化还原酶(CPR)共表达的条件优化 | 第46-59页 |
| 3.1 材料与方法 | 第47-51页 |
| 3.1.1 化学试剂 | 第47页 |
| 3.1.2 CYP9M10基因和CPR基因全长克隆,构建表达载体 | 第47-48页 |
| 3.1.3 LR连接反应 | 第48页 |
| 3.1.4 转染昆虫细胞 | 第48-49页 |
| 3.1.5 扩增病毒液,准备P2病毒储存液 | 第49页 |
| 3.1.6 测定P2重组病毒液的滴度 | 第49页 |
| 3.1.7 重组蛋白的表达和和表达条件的优化 | 第49-50页 |
| 3.1.8 细胞裂解液的准备 | 第50页 |
| 3.1.9 P450含量测定 | 第50-51页 |
| 3.1.10 CPR活性测定 | 第51页 |
| 3.1.11 细胞色素氧化还原活性测定(ECOD实验) | 第51页 |
| 3.2 结果和分析 | 第51-57页 |
| 3.2.1 CYP9M10和CPR平末端PCR产物,表达质粒的鉴定 | 第51-52页 |
| 3.2.2 CYP9M10和CPR重组病毒的PCR鉴定 | 第52-53页 |
| 3.2.3 重组CYP9M10和CPR病毒转染sf9细胞症状 | 第53页 |
| 3.2.4 P450含量测定和CPR活性测定 | 第53-54页 |
| 3.2.5 优化血红素前体和氯化血红素浓度 | 第54-55页 |
| 3.2.6 优化CYP9M10和CPR共表达的MOI | 第55-57页 |
| 3.3 讨论 | 第57-59页 |
| 第四章 CYP9M10和CYP6AA7的外源表达及其在致倦库蚊抗药性中的作用 | 第59-79页 |
| 4.1 材料与方法 | 第59-66页 |
| 4.1.1 化学试剂 | 第59-60页 |
| 4.1.2 CYP6AA7基因全长克隆,构建表达载体 | 第60页 |
| 4.1.3 LR连接反应 | 第60-61页 |
| 4.1.4 转染昆虫细胞 | 第61页 |
| 4.1.5 扩增病毒液,准备P2病毒储存液 | 第61-62页 |
| 4.1.6 测定P2重组病毒液的滴度 | 第62页 |
| 4.1.7 CYP9M10和CYP6AA7与CPR的共表达 | 第62页 |
| 4.1.8 微粒体蛋白的准备 | 第62-63页 |
| 4.1.9 P450含量测定 | 第63页 |
| 4.1.10 CPR活性测定 | 第63页 |
| 4.1.11 细胞色素氧化还原活性测定(ECOD实验) | 第63-64页 |
| 4.1.12 细胞毒性试验 | 第64页 |
| 4.1.13 杀虫剂代谢抗药性 | 第64-66页 |
| 4.1.14 PBOH、PBCHO和PBCOOH的生物测定 | 第66页 |
| 4.2 结果与分析 | 第66-76页 |
| 4.2.1 P450含量和CPR活性 | 第66-67页 |
| 4.2.2 微粒体蛋白CYP9M10/CPR和CYP6AA7/CPR ECOD活性 | 第67页 |
| 4.2.3 表达CYP9M10或CYP6AA7的sf9细胞的化合物毒性实验 | 第67-70页 |
| 4.2.4 杀虫剂的代谢 | 第70-76页 |
| 4.2.5 生物测定结果 | 第76页 |
| 4.3 讨论 | 第76-79页 |
| 第五章 致倦库蚊P450s在苄氯菊酯抗性中的作用 | 第79-92页 |
| 5.1 材料与方法 | 第79-85页 |
| 5.1.1 化学试剂 | 第79页 |
| 5.1.2 P450基因的全长克隆,构建表达载体 | 第79-80页 |
| 5.1.3 LR连接反应 | 第80-81页 |
| 5.1.4 转染昆虫细胞 | 第81-82页 |
| 5.1.5 扩增病毒液,准备P2病毒储存液 | 第82页 |
| 5.1.6 测定P2重组病毒液的滴度 | 第82页 |
| 5.1.7 CYP与CPR的共表达 | 第82-83页 |
| 5.1.8 微粒体蛋白的准备 | 第83页 |
| 5.1.9 P450含量测定 | 第83页 |
| 5.1.10 CPR活性测定 | 第83页 |
| 5.1.11 细胞色素氧化还原酶活性测定(ECOD实验) | 第83-84页 |
| 5.1.12 细胞毒性试验 | 第84页 |
| 5.1.13 苄氯菊酯代谢实验 | 第84-85页 |
| 5.2 结果与分析 | 第85-91页 |
| 5.2.1 P450含量和CPR活性测定 | 第85页 |
| 5.2.2 共表达的CYP/CPR的ECOD活性 | 第85-86页 |
| 5.2.3 细胞毒性实验 | 第86页 |
| 5.2.4 苄氯菊酯代谢 | 第86-91页 |
| 5.3 讨论 | 第91-92页 |
| 第六章 致倦库蚊中与苄氯菊酯抗药性有关的三个羧酸酯酶的功能研究 | 第92-113页 |
| 6.1 材料与方法 | 第93-100页 |
| 6.1.1 化学试剂 | 第93页 |
| 6.1.2 供试致倦库蚊 | 第93-94页 |
| 6.1.3 节氯菊酯处理 | 第94页 |
| 6.1.4 RNA提取和cDNA的合成 | 第94页 |
| 6.1.5 荧光定量PCR (qRT-PCR) | 第94-95页 |
| 6.1.6 三个CarE基因全长克隆,及序列分析 | 第95页 |
| 6.1.7 构建表达载体 | 第95-96页 |
| 6.1.8 准备重组病毒 | 第96页 |
| 6.1.9 转染昆虫细胞 | 第96-97页 |
| 6.1.10 扩增病毒液,准备P2病毒储存液 | 第97页 |
| 6.1.11 测定P2重组病毒液的滴度 | 第97-98页 |
| 6.1.12 CarEs外源表达 | 第98页 |
| 6.1.13 CarEs酶液和表达的蛋白的准备 | 第98页 |
| 6.1.14 羧酸酯酶活性测定 | 第98页 |
| 6.1.15 细胞毒性试验 | 第98-99页 |
| 6.1.16 杀虫剂代谢 | 第99页 |
| 6.1.17 同源建模,羧酸酯酶与底物乙酸-1-萘酯和苄氯菊酯的分子对接分析 | 第99-100页 |
| 6.2 结果与分析 | 第100-111页 |
| 6.2.1 种群HAmCq~(G0)和HAmCq~(G8)中羧基/胆碱酯酶(CCEs)表达量的差异 | 第100页 |
| 6.2.2 荧光定量PCR验证三个CCE基因在抗性种群与对照种群中的表达量差异 | 第100-102页 |
| 6.2.3 苄氯菊酯对三个CCE基因的诱导效应分析 | 第102-103页 |
| 6.2.4 三个CCE基因氨基酸序列的分析 | 第103-105页 |
| 6.2.5 致倦库蚊羧酸酯酶或外源表达的羧酸酯酶的底物乙酸-1-萘酯活性 | 第105-106页 |
| 6.2.6 CarEs介导的节氯菊酯代谢 | 第106-108页 |
| 6.2.7 苄氯菊酯细胞毒性实验 | 第108-109页 |
| 6.2.8 同源建模,羧酸酯酶与底物乙酸-1-萘酯和苄氯菊酯的分子对接分析 | 第109-111页 |
| 6.3 讨论 | 第111-113页 |
| 全文总结 | 第113-115页 |
| 创新之处 | 第115页 |
| 问题与展望 | 第115-116页 |
| 参考文献 | 第116-136页 |
| 缩略语 | 第136-137页 |
| 致谢 | 第137-138页 |
| 作者简介 | 第138-139页 |
