| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 1 绪论 | 第9-14页 |
| 1.1 DREB转录因子的研究进展 | 第9-11页 |
| 1.1.1 DREB转录因子的结构特点和功能分析 | 第9-10页 |
| 1.1.2 DREB转录因子的表达方式及调控机制 | 第10页 |
| 1.1.3 DREB在逆境信号传导途径中的作用 | 第10-11页 |
| 1.2 DREB基因在改良植物抗逆性方面的应用研究 | 第11-12页 |
| 1.2.1 DREB基因的抗性机理及克隆 | 第11页 |
| 1.2.2 DREB基因的转化及表达分析 | 第11-12页 |
| 1.3 基因转化烟草的研究 | 第12-13页 |
| 1.3.1 外植体的选择 | 第12页 |
| 1.3.2 抗旱基因转烟草的研究 | 第12-13页 |
| 1.3.3 耐盐基因转烟草的研究 | 第13页 |
| 1.4 研究目的和意义 | 第13-14页 |
| 2 ItDREB基因的克隆及序列分析 | 第14-25页 |
| 2.1 材料与方法 | 第14页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第14页 |
| 2.1.2 菌株及主要试剂 | 第14页 |
| 2.2 试验方法 | 第14-17页 |
| 2.2.1 北陵鸢尾RNA提取方法的确定 | 第14页 |
| 2.2.2 北陵鸢尾总RNA的提取 | 第14-15页 |
| 2.2.3 cDNA第一条链的合成 | 第15页 |
| 2.2.4 PCR扩增反应 | 第15-16页 |
| 2.2.5 PCR产物的回收 | 第16页 |
| 2.2.6 DNA片段与pMD-18T载体连接 | 第16页 |
| 2.2.7 连接产物的转化 | 第16-17页 |
| 2.2.8 质粒的提取 | 第17页 |
| 2.3 结果与分析 | 第17-24页 |
| 2.3.1 总RNA的提取 | 第17页 |
| 2.3.2 基因组去除反应 | 第17-18页 |
| 2.3.3 目的基因的PCR扩增 | 第18页 |
| 2.3.4 PCR产物的回收 | 第18页 |
| 2.3.5 菌落PCR鉴定 | 第18-20页 |
| 2.3.6 序列分析 | 第20页 |
| 2.3.7 DREB转录因子基因氨基酸多序列比对与系统进化分析 | 第20-21页 |
| 2.3.8 ItDREB保守结构域分析 | 第21-22页 |
| 2.3.9 ItDREB基因理化性质分析 | 第22-24页 |
| 2.3.10 ItDREB基因跨膜结构域分析 | 第24页 |
| 2.4 本章小结 | 第24-25页 |
| 3 北陵鸢尾DREB基因的亚细胞定位 | 第25-35页 |
| 3.1 试验材料及试剂 | 第25页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第25页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第25页 |
| 3.2 试验方法 | 第25-31页 |
| 3.2.1 中间表达载体的构建 | 第25-26页 |
| 3.2.2 植物表达载体的构建 | 第26-27页 |
| 3.2.3 植物表达载体转化农杆菌 | 第27-28页 |
| 3.2.4 pBI121-DREB-GFP植物表达载体的构建 | 第28-29页 |
| 3.2.5 亚细胞定位的预测 | 第29页 |
| 3.2.6 植物表达载体pBI121-DREB-GFP在洋葱表皮细胞的定位 | 第29-31页 |
| 3.3 结果与分析 | 第31-34页 |
| 3.3.1 中间表达载体的构建 | 第31页 |
| 3.3.2 植物表达载体 | 第31-33页 |
| 3.3.3 农杆菌菌液PCR | 第33页 |
| 3.3.4 植物表达载体pBI121-DREB-GFP在洋葱中的瞬时表达 | 第33-34页 |
| 3.4 本章小结 | 第34-35页 |
| 4 基因表达模式分析 | 第35-40页 |
| 4.1 试验材料 | 第35页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第35页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第35页 |
| 4.2 方法 | 第35-37页 |
| 4.2.1 植物材料的处理及总RNA的提取 | 第35页 |
| 4.2.2 引物的设计与合成 | 第35页 |
| 4.2.3 反转录反应 | 第35-36页 |
| 4.2.4 PCR检测反应 | 第36页 |
| 4.2.5 实时荧光定量PCR | 第36-37页 |
| 4.3 结果 | 第37-39页 |
| 4.3.1 ItDREB2基因的器官表达分析 | 第37页 |
| 4.3.2 ItDREB基因在不同胁迫下的表达 | 第37-39页 |
| 4.4 本章小结 | 第39-40页 |
| 5 植物表达载体的构建及转化烟草 | 第40-50页 |
| 5.1 试验材料及试剂 | 第40-41页 |
| 5.1.1 试验材料 | 第40页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第40页 |
| 5.1.3 相关培养基、激素及抗生素贮存液的配置 | 第40-41页 |
| 5.2 试验方法 | 第41-45页 |
| 5.2.1 中间表达载体的构建 | 第41页 |
| 5.2.2 植物表达载体的构建 | 第41-42页 |
| 5.2.3 植物表达载体转化农杆菌 | 第42页 |
| 5.2.4 叶盘法转化烟草 | 第42-44页 |
| 5.2.5 抗性植株的分子生物学检测 | 第44-45页 |
| 5.3 结果与分析 | 第45-49页 |
| 5.3.1 中间表达载体的构建 | 第45-46页 |
| 5.3.2 植物表达载体 | 第46-47页 |
| 5.3.3 农杆菌菌液PCR | 第47页 |
| 5.3.4 转基因烟草的再生形态 | 第47页 |
| 5.3.5 转基因烟草检测 | 第47-49页 |
| 5.4 本章小结 | 第49-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 附录A | 第56-57页 |
| 附录B | 第57-58页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
