| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 中英缩略语索引 | 第11-13页 |
| 第1章 绪论 | 第13-24页 |
| 1.1 前言 | 第13-14页 |
| 1.2 L-Arg的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.2.1 L-Arg的功能 | 第14-15页 |
| 1.2.2 L-Arg的检测 | 第15-16页 |
| 1.3 L-Arg高产菌株的诱变育种 | 第16-17页 |
| 1.4 代谢工程育种在提高L-Arg产量方面的研究 | 第17-24页 |
| 1.4.1 L-Arg合成代谢途径的研究 | 第18-21页 |
| 1.4.1.1 L-Arg的生物合成途径 | 第18-19页 |
| 1.4.1.2 L-Arg的生物合成途径的改造 | 第19-21页 |
| 1.4.2 L-Arg合成代谢网络的研究进展 | 第21-24页 |
| 第2章 L-Arg生产菌发酵培养基及发酵条件优化的初步研究 | 第24-36页 |
| 2.1 前言 | 第24-25页 |
| 2.2 材料与方法 | 第25-28页 |
| 2.2.1 材料 | 第25页 |
| 2.2.2 主要试剂与仪器设备 | 第25页 |
| 2.2.3 相关试剂与培养基的配制 | 第25-26页 |
| 2.2.3.1 主要试剂的配制 | 第25页 |
| 2.2.3.2 培养基成分 | 第25-26页 |
| 2.2.4 方法 | 第26-28页 |
| 2.2.4.1 单因素筛选培养基组分 | 第26页 |
| 2.2.4.2 单因素优化培养基组分 | 第26-27页 |
| 2.2.4.3 C. crenatum MT NAGK M4菌株发酵条件的优化 | 第27-28页 |
| 2.2.4.4 L-Arg测定方法 | 第28页 |
| 2.2.4.5 显著性分析 | 第28页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第28-35页 |
| 2.3.1 种子培养基对数生长中期的确定 | 第28-29页 |
| 2.3.2 发酵培养基组分的筛选 | 第29-31页 |
| 2.3.3 L-Arg高产菌株单因素发酵试验结果 | 第31-32页 |
| 2.3.4 摇瓶发酵条件的优化 | 第32-35页 |
| 2.3.4.1 初始pH对发酵产L-Arg的影响 | 第32页 |
| 2.3.4.2 装液量对发酵产L-Arg的影响 | 第32-33页 |
| 2.3.4.3 接种量对发酵产L-Arg的影响 | 第33-34页 |
| 2.3.4.4 温度对发酵产L-Arg的影响 | 第34页 |
| 2.3.4.5 验证实验 | 第34-35页 |
| 2.4 小结 | 第35-36页 |
| 第3章 serB基因缺失菌株的构建及其对产L-Arg的影响 | 第36-53页 |
| 3.1 前言 | 第36-37页 |
| 3.2 实验材料 | 第37-39页 |
| 3.2.1 实验材料与试剂 | 第37-38页 |
| 3.2.1.1 菌株和质粒 | 第37-38页 |
| 3.2.1.2 实验材料和仪器 | 第38页 |
| 3.2.2 培养基 | 第38-39页 |
| 3.2.3 试剂配制方法 | 第39页 |
| 3.3 实验方法 | 第39-48页 |
| 3.3.1 引物设计及合成 | 第39-40页 |
| 3.3.2 感受态细胞制备及转化过程 | 第40-41页 |
| 3.3.3 质粒DNA提取方法 | 第41-42页 |
| 3.3.4 DNA回收及纯化方法 | 第42-43页 |
| 3.3.5 打靶载体构建 | 第43-45页 |
| 3.3.6 同源重组过程和单、双交换重组子筛选方法 | 第45-47页 |
| 3.3.7 敲除株产L-Arg摇瓶发酵实验方法 | 第47页 |
| 3.3.8 菌体生长量测定方法 | 第47页 |
| 3.3.9 L-Arg测定方法 | 第47页 |
| 3.3.10发酵液残糖量测定方法 | 第47-48页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第48-52页 |
| 3.4.1 pK18mobsacB-CL-CR打靶载体构建 | 第48-50页 |
| 3.4.2 筛选双交换重组子 | 第50-51页 |
| 3.4.3 C.crenatum NAGK M4 ?serB摇瓶发酵结果 | 第51-52页 |
| 3.5 小结 | 第52-53页 |
| 第4章 NADPH对钝齿棒杆菌产L-Arg的影响 | 第53-78页 |
| 4.1 前言 | 第53-56页 |
| 4.2 实验材料 | 第56-57页 |
| 4.2.1 实验材料与试剂 | 第56-57页 |
| 4.2.1.1 菌株和质粒 | 第56-57页 |
| 4.2.1.2 酶、试剂和实验仪器 | 第57页 |
| 4.2.2 培养基 | 第57页 |
| 4.2.3 试剂配制方法 | 第57页 |
| 4.3 实验方法 | 第57-65页 |
| 4.3.1 引物设计及合成 | 第57页 |
| 4.3.2 基因序列信息及蛋白序列比对 | 第57-59页 |
| 4.3.3 感受态细胞制备及转化过程 | 第59页 |
| 4.3.4 质粒DNA提取方法 | 第59页 |
| 4.3.5 DNA回收及纯化方法 | 第59页 |
| 4.3.6 改良的电转方法 | 第59-60页 |
| 4.3.7 敲除载体构建方法 | 第60-62页 |
| 4.3.8 同源重组过程和单、双交换重组子筛选方法 | 第62页 |
| 4.3.9 各种酶及NADPH的测定方法 | 第62-64页 |
| 4.3.9.1 细胞内NADPH含量的测定 | 第63-64页 |
| 4.3.10 替换菌株产L-Arg摇瓶发酵实验方法 | 第64-65页 |
| 4.3.10.1 菌体生长量测定方法 | 第64-65页 |
| 4.3.10.2 L-Arg测定方法及计算 | 第65页 |
| 4.3.10.3 发酵液残糖量测定方法 | 第65页 |
| 4.4 实验结果 | 第65-77页 |
| 4.4.1 pK18mobsacB-?A与pK18mobsacB-?A::B重组载体构建 | 第65-69页 |
| 4.4.2 筛选单交换子与双交换子 | 第69-71页 |
| 4.4.3 重组菌株NADPH含量的测定 | 第71-72页 |
| 4.4.4 重组菌株转化子摇瓶发酵实验 | 第72-77页 |
| 4.5 小结 | 第77-78页 |
| 第5章 结论与展望 | 第78-81页 |
| 5.1 结论 | 第78-79页 |
| 5.1.1 培养基的优化有利于L-Arg产量的提高 | 第78页 |
| 5.1.2 serB基因的缺陷不利于菌株的生长及L-Arg的生物合成 | 第78-79页 |
| 5.1.3 NADPH的提高有利于菌株的L-Arg生物合成 | 第79页 |
| 5.2 展望 | 第79-81页 |
| 5.2.1 发酵培养基进一步的优化 | 第79页 |
| 5.2.2 NADPH的提高有利于菌株L-Arg的生物合成 | 第79-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-88页 |
| 附录 | 第88-94页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第94页 |
