| 致谢 | 第4-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| 1 文献综述 | 第8-15页 |
| 1.1 c-di-GMP | 第9-10页 |
| 1.2 c-GAMP | 第10-11页 |
| 1.3 c GAS | 第11-12页 |
| 1.4 丙酸诱导型原核表达系统 | 第12-13页 |
| 1.5 融合标签 | 第13-14页 |
| 1.5.1 His6亲和标签 | 第13页 |
| 1.5.2 Cherry可溶标签 | 第13-14页 |
| 1.6 TEV蛋白酶 | 第14页 |
| 1.7 展望 | 第14-15页 |
| 2 引言 | 第15-16页 |
| 3 材料与方法 | 第16-23页 |
| 3.1 试验材料 | 第16-19页 |
| 3.1.1 菌种和质粒 | 第16页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第16-17页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第17页 |
| 3.1.4 常规生化试剂的配制 | 第17-19页 |
| 3.2 试验方法 | 第19-23页 |
| 3.2.1 环二核苷酸合成酶基因线性片段的获取 | 第19-20页 |
| 3.2.1.1 环二核苷酸合成酶基因的扩增 | 第19页 |
| 3.2.1.2 酶切获取环二核苷酸合成酶基因 | 第19-20页 |
| 3.2.2 丙酸诱导型载体线性片段的获取 | 第20页 |
| 3.2.3 pEX-环二核苷酸合成酶 (pEX-cDNS) 重组质粒的构建 | 第20页 |
| 3.2.4 重组质粒的鉴定 | 第20页 |
| 3.2.4.1 双酶切鉴定 | 第20页 |
| 3.2.4.2 测序鉴定 | 第20页 |
| 3.2.5 重组质粒的原核表达及鉴定 | 第20-21页 |
| 3.2.5.1 重组质粒的原核表达 | 第20页 |
| 3.2.5.2 SDS-PAGE电泳鉴定 | 第20-21页 |
| 3.2.6 融合蛋白可溶性分析 | 第21页 |
| 3.2.6.1 Western blot分析 | 第21页 |
| 3.2.7 霍乱弧菌环二核苷酸合成酶 (VC0179) 重组蛋白的纯化及功能活性分析 | 第21-23页 |
| 3.2.7.1 霍乱弧菌环二核苷酸合成酶 (VC0179) 重组蛋白的纯化及TEV酶切 | 第21-22页 |
| 3.2.7.2 霍乱弧菌环二核苷酸合成酶 (VC0179) 体外功能活性分析 | 第22-23页 |
| 4 结果与分析 | 第23-29页 |
| 4.1 环二核苷酸合成酶基因线性片段的获取 | 第23页 |
| 4.2 pEX-环二核苷酸合成酶 (pEX-cDNS) 重组质粒的鉴定 | 第23-25页 |
| 4.2.1 双酶切鉴定 | 第23-24页 |
| 4.2.2 测序鉴定 | 第24-25页 |
| 4.3 重组质粒的原核表达及鉴定 | 第25-26页 |
| 4.4 融合蛋白可溶性分析 | 第26-27页 |
| 4.5 霍乱弧菌环二核苷酸合成酶 (VC0179) 重组蛋白的纯化及功能活性分析 | 第27-29页 |
| 4.5.1 霍乱弧菌环二核苷酸合成酶 (VC0179) 重组蛋白的纯化及TEV酶切 | 第27页 |
| 4.5.2 霍乱弧菌环二核苷酸合成酶 (VC0179) 体外功能活性分析 | 第27-29页 |
| 5 讨论与结论 | 第29-31页 |
| 5.1 讨论 | 第29-30页 |
| 5.2 结论 | 第30-31页 |
| 参考文献 | 第31-37页 |
| 英文摘要 | 第37-38页 |
