| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 前言 | 第11-14页 |
| 实验材料和方法 | 第14-29页 |
| 1 实验材料与来源 | 第14-17页 |
| 1.1 细胞、菌株和质粒 | 第14页 |
| 1.2 主要试剂 | 第14-16页 |
| 1.3 实验仪器 | 第16页 |
| 1.4 主要试剂配方 | 第16-17页 |
| 2 实验方法 | 第17-29页 |
| 2.1 用SWATH-MS筛查GCC与NSTC培养上清中的差异蛋白 | 第17-18页 |
| 2.2 检测GSC分化前后Pirin在蛋白质水平表达差异 | 第18页 |
| 2.3 检测GSC分化前后Pirin在mRNA水平表达差异 | 第18-20页 |
| 2.4 构建PLKO.1-Pirin-Flag质粒 | 第20-23页 |
| 2.5 构建Pirin-Flag过表达质粒 | 第23-26页 |
| 2.6 293 TN细胞转染Pirin-Flag质粒并检测其表达 | 第26页 |
| 2.7 病毒包装及感染GSC | 第26-27页 |
| 2.8 敲低Pirin检测GSC形成肿瘤细胞球的能力和细胞活力 | 第27页 |
| 2.9 限制性梯度稀释实验 | 第27-28页 |
| 2.10 抑制Pirin检测GSC的细胞活力 | 第28页 |
| 2.11 数据处理及统计学分析 | 第28-29页 |
| 实验结果 | 第29-40页 |
| 1 基于SWATH-MS的脑胶质瘤非标记定量蛋白组学分析 | 第29-30页 |
| 2 利用数据库分析Pirin与脑胶质瘤临床表型的相关性 | 第30页 |
| 3 Pirin在GSC中特异性高表达 | 第30-31页 |
| 4 在GSC分化过程中Pirin的表达水平逐渐降低 | 第31-32页 |
| 5 构建PLKO.1-Pirin-shRNA和Pirin-flag质粒 | 第32-34页 |
| 5.1 构建PLKO.1-Pirin-shRNA质粒 | 第32页 |
| 5.2 构建Pirin-Flag过表达质粒 | 第32-34页 |
| 6 敲低Pirin的表达显著抑制GSC的自我更新能力 | 第34-36页 |
| 6.1 肿瘤细胞球形成实验 | 第34-35页 |
| 6.2 限制性梯度稀释实验 | 第35-36页 |
| 7 敲低或抑制Pirin均能抑制GSC的细胞活力 | 第36-38页 |
| 7.1 敲低Pirin的表达明显抑制GSC的细胞活力 | 第36-37页 |
| 7.2 抑制Pirin活性明显抑制GSC的细胞活力 | 第37-38页 |
| 8 敲低Pirin对NSTC的细胞活力没有明显影响 | 第38-39页 |
| 9 构建稳定过表达Pirin-Flag的GSC细胞系 | 第39-40页 |
| 讨论 | 第40-42页 |
| 结论 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-49页 |
| 主要简历 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50页 |
