| 中文摘要 | 第3-4页 |
| 英文摘要 | 第4-5页 |
| 英文缩略词对照表 | 第10-12页 |
| 1 绪论 | 第12-18页 |
| 1.1 研究背景 | 第12-13页 |
| 1.1.1 RNA干扰（RNAi） | 第12页 |
| 1.1.2 小干扰RNA（siRNA） | 第12-13页 |
| 1.2 诱导型RNAi研究现状 | 第13-15页 |
| 1.2.1 诱导型RNAi系统的载体 | 第13页 |
| 1.2.2 诱导型RNAi系统的分类 | 第13-14页 |
| 1.2.3 诱导型RNAi系统的作用机制 | 第14-15页 |
| 1.3 本文研究的目的及意义 | 第15页 |
| 1.4 本文研究内容 | 第15-18页 |
| 1.4.1 研究内容 | 第15-16页 |
| 1.4.2 研究技术路线 | 第16-18页 |
| 2 细胞的培养和观察 | 第18-26页 |
| 2.1 引言 | 第18页 |
| 2.2 细胞培养材料和设备 | 第18-20页 |
| 2.2.1 细胞株 | 第18-19页 |
| 2.2.2 细胞培养试剂与器材 | 第19-20页 |
| 2.3 细胞培养准备工作 | 第20-21页 |
| 2.3.1 培养用品的清洗灭菌 | 第20页 |
| 2.3.2 培养用液的配制 | 第20-21页 |
| 2.4 细胞培养方法 | 第21-22页 |
| 2.4.1 细胞复苏 | 第21页 |
| 2.4.2 细胞换液 | 第21页 |
| 2.4.3 细胞传代 | 第21页 |
| 2.4.4 细胞冻存 | 第21-22页 |
| 2.5 细胞形态观察 | 第22-24页 |
| 2.6 本章小结 | 第24-26页 |
| 3 选取合适的热休克元件和肿瘤特异性启动子 | 第26-30页 |
| 3.1 引言 | 第26-27页 |
| 3.2 实验方法 | 第27-29页 |
| 3.2.1 选取合适的热休克元件 | 第27-28页 |
| 3.2.2 选取合适的肿瘤特异性启动子 | 第28-29页 |
| 3.3 结果分析与讨论 | 第29-30页 |
| 4 构建含肿瘤特异性启动子的质粒phTERTp-EGFP和phTERT/HSEp-EGFP | 第30-42页 |
| 4.1 引言 | 第30页 |
| 4.2 实验材料和仪器 | 第30-31页 |
| 4.2.1 主要仪器和设备 | 第30-31页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第31页 |
| 4.3 实验准备工作 | 第31-32页 |
| 4.3.1 实验用品的清洗和灭菌 | 第31页 |
| 4.3.2 实验用液的配制和灭菌 | 第31-32页 |
| 4.4 实验方法 | 第32-37页 |
| 4.4.1 PCR扩增目的片段 | 第32-34页 |
| 4.4.2 琼脂糖凝胶电泳 | 第34-35页 |
| 4.4.3 目的片段的纯化 | 第35页 |
| 4.4.4 感受态制备 | 第35页 |
| 4.4.5 质粒的重构 | 第35-36页 |
| 4.4.6 重构质粒扩大培养 | 第36-37页 |
| 4.4.7 质粒提取 | 第37页 |
| 4.5 实验结果 | 第37-40页 |
| 4.5.1 PCR鉴定重构质粒phTERTp-EGFP和phTERT/HSEp-EGFP | 第37-38页 |
| 4.5.2 测序鉴定重构质粒phTERTp-EGFP和phTERT/HSEp-EGFP | 第38-40页 |
| 4.6 结果分析与讨论 | 第40-42页 |
| 5 鉴定phTERTp-EGFP和phTERT/HSEp-EGFP质粒的表达能力31 | 第42-52页 |
| 5.1 引言 | 第42页 |
| 5.2 实验材料和仪器 | 第42-44页 |
| 5.2.1 实验细胞 | 第42页 |
| 5.2.2 实验装置和仪器 | 第42-43页 |
| 5.2.3 实验材料和试剂 | 第43-44页 |
| 5.3 实验方法 | 第44-47页 |
| 5.3.1 瞬时表达质粒转染细胞 | 第44页 |
| 5.3.2 热激 | 第44页 |
| 5.3.3 蛋白样品的提取 | 第44-45页 |
| 5.3.4 蛋白含量的测定 | 第45页 |
| 5.3.5 western blot检测蛋白表达 | 第45-47页 |
| 5.4 实验结果 | 第47-50页 |
| 5.4.1 鉴定插入不同HSE的hTERT启动子驱动表达EGFP的能力 | 第47-48页 |
| 5.4.2 鉴定phTERTp-EGFP和phTERT/HSEp-EGFP质粒在人正常细胞中的瞬时表达 | 第48-50页 |
| 5.5 结果分析与讨论 | 第50-52页 |
| 6 构建可表达si RNA的质粒pMhTERTpsiRNA和pMhTERT/HSEpsiRNA | 第52-62页 |
| 6.1 引言 | 第52-53页 |
| 6.2 实验材料和仪器 | 第53-54页 |
| 6.2.1 主要仪器和设备 | 第53页 |
| 6.2.2 主要试剂 | 第53-54页 |
| 6.3 实验准备工作 | 第54页 |
| 6.3.1 实验用品的清洗和灭菌 | 第54页 |
| 6.3.2 实验用液的配制和灭菌 | 第54页 |
| 6.4 实验方法 | 第54-56页 |
| 6.4.1 PCR扩增目的片段 | 第54-55页 |
| 6.4.2 退火形成siSNCG双链 | 第55页 |
| 6.4.3 琼脂糖凝胶电泳 | 第55页 |
| 6.4.4 目的片段的纯化 | 第55页 |
| 6.4.5 感受态制备 | 第55页 |
| 6.4.6 质粒的重构 | 第55-56页 |
| 6.4.7 重构质粒扩大培养 | 第56页 |
| 6.4.8 质粒提取 | 第56页 |
| 6.5 实验结果 | 第56-61页 |
| 6.5.1 pMhTERTpsil和pMhTERT/HSEpsil质粒的构建 | 第56-59页 |
| 6.5.2 pMhTERTpsiSNCG和pMhTERT/HSEpsiSNCG质粒的构建 | 第59-61页 |
| 6.6 结果分析与讨论 | 第61-62页 |
| 7 检测可调控型siRNA表达载体对SNCG基因的敲除效果 | 第62-72页 |
| 7.1 引言 | 第62页 |
| 7.2 实验材料和仪器 | 第62-64页 |
| 7.2.1 实验细胞 | 第62页 |
| 7.2.2 实验装置和仪器 | 第62-63页 |
| 7.2.3 实验材料和试剂 | 第63-64页 |
| 7.3 实验方法 | 第64-66页 |
| 7.3.1 总RNA提取与检测 | 第64页 |
| 7.3.2 RNA反转录成cDNA | 第64-65页 |
| 7.3.3 SqRT-PCR 检测基因表达 | 第65-66页 |
| 7.3.4 瞬时表达质粒转染细胞 | 第66页 |
| 7.3.5 热激 | 第66页 |
| 7.3.6 蛋白样品的提取 | 第66页 |
| 7.3.7 蛋白含量的测定 | 第66页 |
| 7.3.8 western blot检测蛋白表达 | 第66页 |
| 7.4 实验结果 | 第66-71页 |
| 7.4.1 在MCF-7 细胞中从RNA水平上检测SNCG的表达 | 第66-68页 |
| 7.4.2 在HepG2 细胞中从RNA水平上检测SNCG的表达 | 第68-70页 |
| 7.4.3 在HepG2 细胞中从蛋白表达水平上检测SNCG的表达 | 第70-71页 |
| 7.6 结果分析与讨论 | 第71-72页 |
| 8 结论与展望 | 第72-74页 |
| 8.1 本研究主要结论 | 第72-73页 |
| 8.2 后续工作展望 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 附录 作者在攻读硕士学位期间发表论文目录 | 第82页 |
