| 摘要 | 第11-14页 |
| Abstract | 第14-17页 |
| 1 前言 | 第18-30页 |
| 1.1 乳腺发育和泌乳 | 第18-19页 |
| 1.1.1 乳腺发育和泌乳的形成机制 | 第18页 |
| 1.1.2 乳腺发育和泌乳的研究历程 | 第18-19页 |
| 1.1.3 乳腺发育和泌乳的营养学调控 | 第19页 |
| 1.2 乳蛋白的合成机理 | 第19-20页 |
| 1.2.1 乳蛋白的成分 | 第19-20页 |
| 1.2.2 乳蛋白的生物合成 | 第20页 |
| 1.3 分子营养学概述 | 第20-21页 |
| 1.3.1 分子营养学 | 第20-21页 |
| 1.3.2 营养素与基因表达 | 第21页 |
| 1.3.3 奶牛的分子营养学研究 | 第21页 |
| 1.4 氨基酸对乳蛋白合成的调节 | 第21-23页 |
| 1.4.1 理想蛋白质模型和氨基酸平衡理论的提出 | 第21-22页 |
| 1.4.2 氨基酸影响乳蛋白合成 | 第22-23页 |
| 1.5 STAT5A对乳蛋白合成的调节 | 第23-27页 |
| 1.5.1 STAT家族概述及其在乳腺中的作用 | 第23-24页 |
| 1.5.2 STAT5A的发现及其在乳腺中的作用 | 第24-25页 |
| 1.5.3 JAK2-STAT5A信号转导途径对乳蛋白合成的影响 | 第25-26页 |
| 1.5.4 STAT5A的负调控 | 第26-27页 |
| 1.6 氨基酸与泌乳功能基因互作对乳蛋白合成的调节 | 第27-28页 |
| 1.6.1 氨基酸对泌乳功能基因表达的调节 | 第27-28页 |
| 1.6.2 泌乳功能基因表达对氨基酸的需求 | 第28页 |
| 1.7 研究目的和意义 | 第28-30页 |
| 2 材料与方法 | 第30-47页 |
| 2.1 实验材料 | 第30页 |
| 2.2 实验试剂 | 第30-32页 |
| 2.3 实验仪器 | 第32-33页 |
| 2.4 实验方法 | 第33-46页 |
| 2.4.1 奶牛乳腺上皮细胞的原代培养与鉴定 | 第33-34页 |
| 2.4.2 促进乳蛋白合成最佳浓度配比氨基酸的筛选 | 第34-40页 |
| 2.4.3 确定泌乳合成重要功能基因STAT5A作为研究对象 | 第40-41页 |
| 2.4.4 STAT5A基因沉寂与氨基酸互作对奶牛乳腺上皮细胞泌乳能力的影响 | 第41-43页 |
| 2.4.5 STAT5A过表达对奶牛乳腺上皮细胞氨基酸需求和泌乳能力的影响 | 第43-46页 |
| 2.5 数据处理 | 第46-47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-68页 |
| 3.1 奶牛乳腺上皮细胞的原代培养与鉴定 | 第47-48页 |
| 3.2 促进乳蛋白合成的最佳氨基酸浓度筛选 | 第48-55页 |
| 3.2.1 细胞饥饿时间点筛选 | 第48页 |
| 3.2.2 单一必需氨基酸促进乳蛋白合成的优先序筛选 | 第48-49页 |
| 3.2.3 单一必需氨基酸对奶牛乳腺上皮细胞活力和增殖的影响 | 第49页 |
| 3.2.4 单一必需氨基酸对泌乳功能基因表达的影响 | 第49-51页 |
| 3.2.5 单一必需氨基酸对乳脂和乳糖合成的影响 | 第51-52页 |
| 3.2.6 正交实验筛选乳蛋白合成的最佳浓度配比氨基酸 | 第52页 |
| 3.2.7 不同浓度配比氨基酸对奶牛乳腺上皮细胞活力和增殖的影响 | 第52-53页 |
| 3.2.8 最佳浓度配比氨基酸对泌乳功能基因表达的影响 | 第53-55页 |
| 3.2.9 最佳浓度配比氨基酸对乳脂和乳糖合成的影响 | 第55页 |
| 3.3 筛选泌乳相关功能基因STAT5A作为研究对象 | 第55-57页 |
| 3.3.1 分析不同的奶牛乳腺组织筛选出差异表达基因STAT5A | 第55-56页 |
| 3.3.2 STAT5A在乳腺组织和细胞中的定位及表达 | 第56-57页 |
| 3.4 STAT5A基因沉寂与不同浓度氨基酸配比互作对奶牛乳腺上皮细胞泌乳能力的影响 | 第57-61页 |
| 3.4.1 STAT5A最佳干扰片段和干扰时间选择 | 第57-58页 |
| 3.4.2 STAT5A基因沉寂与不同浓度配比氨基酸互作对奶牛乳腺上皮细胞活力的影响 | 第58-59页 |
| 3.4.3 STAT5A基因沉寂与不同浓度配比氨基酸互作对泌乳信号通路关键功能基因的影响 | 第59-61页 |
| 3.4.4 STAT5A基因沉寂与不同浓度配比氨基酸互作对奶牛乳腺上皮细胞合成乳脂、乳糖的影响 | 第61页 |
| 3.5 STAT5A基因过表达与不同浓度配比氨基酸互作对奶牛乳腺上皮细胞泌乳能力的影响 | 第61-66页 |
| 3.5.1 真核表达载体pEGFP-C1-Stat5a的构建 | 第61-62页 |
| 3.5.2 真核表达载体pEGFP-C1-Stat5a转染效率检测 | 第62-63页 |
| 3.5.3 真核表达载体pEGFP-C1-Stat5a转染与与不同浓度配比氨基酸互作对奶牛乳腺上皮细胞活力的影响 | 第63-64页 |
| 3.5.4 真核表达载体pEGFP-C1-Stat5a转染与不同浓度氨基酸配比互作对泌乳信号通路关键基因的影响 | 第64-66页 |
| 3.5.5 真核表达载体pEGFP-C1-Stat5a转染与不同浓度氨基酸配比互作对奶牛乳腺上皮细胞合成乳脂、乳糖的影响 | 第66页 |
| 3.6 奶牛乳腺上皮细胞中氨基酸与STAT5A基因互作示意图 | 第66-68页 |
| 4 讨论 | 第68-78页 |
| 4.1 奶牛乳腺上皮细胞的原代培养及鉴定 | 第68-69页 |
| 4.1.1 原代细胞培养方法的比较 | 第68页 |
| 4.1.2 乳腺上皮细胞泌乳功能鉴定 | 第68-69页 |
| 4.2 以乳腺上皮细胞为模型研究奶牛泌乳氨基酸模式的必要性 | 第69页 |
| 4.3 氨基酸饥饿模型的建立 | 第69-70页 |
| 4.4 必需氨基酸对奶牛乳腺上皮细胞泌乳能力的影响 | 第70-72页 |
| 4.4.1 必需氨基酸促进乳蛋白合成的优先序分析 | 第70-71页 |
| 4.4.2 必需氨基酸对奶牛乳腺上皮细胞活力和增殖的影响 | 第71页 |
| 4.4.3 必需氨基酸对乳蛋白信号通路关键基因表达的影响 | 第71-72页 |
| 4.4.4 必需氨基酸对奶牛乳腺上皮细胞分泌乳脂和乳糖的影响 | 第72页 |
| 4.5 最佳浓度配比氨基酸模式对奶牛乳腺上皮细胞泌乳能力的影响 | 第72-74页 |
| 4.5.1 促进乳蛋白合成的最佳浓度配比氨基酸模式的提出 | 第72-73页 |
| 4.5.2 最佳浓度配比氨基酸模式对氨酰tRNA合成酶表达的影响 | 第73-74页 |
| 4.5.3 最佳浓度配比氨基酸模式对乳蛋白信号通路关键基因表达的影响 | 第74页 |
| 4.5.4 最佳浓度配比氨基酸模式对奶牛乳腺上皮细胞分泌乳脂和乳糖的影响 | 第74页 |
| 4.6 真核表达载体pEGFP-C1-Stat5a的构建 | 第74-75页 |
| 4.7 STAT5A对奶牛乳腺上皮细胞泌乳能力的影响 | 第75页 |
| 4.8 不同浓度配比氨基酸与STAT5A基因互作对奶牛乳腺上皮细胞泌乳能力的影响 | 第75-78页 |
| 4.8.1 不同浓度配比氨基酸与STAT5A基因互作对奶牛乳腺上皮细胞活力和增殖能力的影响 | 第75-76页 |
| 4.8.2 不同浓度配比氨基酸与STAT5A基因互作对泌乳相关基因表达的影响 | 第76-77页 |
| 4.8.3 不同浓度配比氨基酸与STAT5A基因互作对奶牛乳腺上皮细胞分泌乳脂和乳糖的影响 | 第77-78页 |
| 5 结论 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-90页 |
| 附录 | 第90-96页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第96页 |
