| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 目录 | 第6-9页 |
| 前言 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-21页 |
| 1.1 GPS2 蛋白 | 第10-14页 |
| 1.1.1 GPS2 参与炎症反应和稳态平衡 | 第10-11页 |
| 1.1.2 GPS2 与肥胖相关 | 第11-12页 |
| 1.1.3 GPS2 参与油脂分化调控 | 第12页 |
| 1.1.4 GPS2 参与胆固醇代谢及胆汁酸合成的调节 | 第12-13页 |
| 1.1.5 GPS2 参与某些病毒作用过程 | 第13页 |
| 1.1.6 GPS2 可能参与脑的形态发生 | 第13-14页 |
| 1.1.7 GPS2 其他功能 | 第14页 |
| 1.1.8 GPS2 研究前景 | 第14页 |
| 1.2 基因敲除技术 | 第14-20页 |
| 1.2.1 ZFNs（Zinc-finger nucleases）技术 | 第16-17页 |
| 1.2.2 Talen（transcription activator-like effector nucleases）技术 | 第17-18页 |
| 1.2.3 CRISPR/Cas （ clustered regulatory interspaced short palindromicrepeats/CRISPR associated systems）技术 | 第18-19页 |
| 1.2.4 基因敲除新技术前景 | 第19-20页 |
| 1.3 本课题研究的意义 | 第20-21页 |
| 第二章 GPS2 抗体制备 | 第21-39页 |
| 2.1 材料和方法 | 第21-32页 |
| 2.1.1 主要仪器设备 | 第21-22页 |
| 2.1.2 主要试剂及试剂盒 | 第22-23页 |
| 2.1.3 常用溶液的配置 | 第23-24页 |
| 2.1.4 GPS2 全长 T 载体构建 | 第24-27页 |
| 2.1.5 GPS2 全长 pFLAG-CMV 载体和 pET28b 载体构建 | 第27-29页 |
| 2.1.6 细胞转染 | 第29页 |
| 2.1.7 细胞总蛋白的定量和提取 | 第29-30页 |
| 2.1.8 蛋白质免疫印迹(western blot) | 第30页 |
| 2.1.9 GPS2 蛋白诱导表达 | 第30-31页 |
| 2.1.10 蛋白纯化，免疫和细胞融合 | 第31页 |
| 2.1.11 杂交瘤细胞株筛选，扩大培养和冻存 | 第31-32页 |
| 2.2 实验结果 | 第32-36页 |
| 2.2.1 小鼠 T-GPS2 载体的构建 | 第32-34页 |
| 2.2.2 pFLAG-CMV 载体/pET28b 载体构建 | 第34页 |
| 2.2.3 pET28b-GPS2 载体表达鉴定 | 第34-35页 |
| 2.2.4 GPS2 多克隆抗体验证 | 第35-36页 |
| 2.2.5 GPS2 单克隆抗体筛选和验证 | 第36页 |
| 2.3 讨论 | 第36-38页 |
| 2.4 小结 | 第38-39页 |
| 第三章 GPS2 基因敲除小鼠构建及表型分析 | 第39-71页 |
| 3.1 材料和方法 | 第39-48页 |
| 3.1.1 主要仪器设备 | 第39页 |
| 3.1.2 主要试剂及试剂盒 | 第39-40页 |
| 3.1.3 常用溶液的配置 | 第40页 |
| 3.1.4 荧光定量 PCR | 第40-41页 |
| 3.1.5 蛋白免疫印迹（Western blot） | 第41页 |
| 3.1.6 CEL-I 实验 | 第41页 |
| 3.1.7 GPS2 敲除小鼠制备 | 第41页 |
| 3.1.8 小鼠基因组提取 | 第41-42页 |
| 3.1.9 突变体小鼠的筛选及基因型鉴定 | 第42页 |
| 3.1.10 T 载体构建 | 第42-44页 |
| 3.1.11 小鼠基因型鉴定 | 第44-45页 |
| 3.1.12 小鼠繁育和孕鼠获得 | 第45页 |
| 3.1.13 胚胎解剖 | 第45页 |
| 3.1.14 全胚 TUNEL 实验 | 第45-47页 |
| 3.1.15 全胚免疫荧光实验 | 第47-48页 |
| 3.1.16 统计学分析 | 第48页 |
| 3.2 实验结果 | 第48-66页 |
| 3.2.1 GPS2 表达谱的检测 | 第48-50页 |
| 3.2.2 GPS2 特异性 ZNF 活性检测 | 第50-51页 |
| 3.2.3 Founder 小鼠的筛选 | 第51页 |
| 3.2.4 Founder 小鼠基因型的确定 | 第51-53页 |
| 3.2.5 F1 代杂合小鼠后代中无 GPS2 敲除纯合小鼠 | 第53页 |
| 3.2.6 胚胎致死的确定 | 第53-56页 |
| 3.2.7 GPS2 敲除胚胎致死表型分析 | 第56-64页 |
| 3.2.8 GPS2 敲除胚胎凋亡细胞增多 | 第64-65页 |
| 3.2.9 GPS2 敲除胚胎血管发育异常，凋亡增加 | 第65页 |
| 3.2.10 GPS2 敲除胚胎中基因表达变化检测 | 第65-66页 |
| 3.3 讨论 | 第66-70页 |
| 3.3.1 GPS2 相关因子缺失也会引起胚胎致死 | 第66-67页 |
| 3.3.2 致死时间与造血发育过程的相关性 | 第67-68页 |
| 3.3.3 致死表型与胎盘的相关性 | 第68-69页 |
| 3.3.4 致死表型与分子机制的相关性 | 第69-70页 |
| 3.4 小结 | 第70-71页 |
| 第四章 结论和展望 | 第71-72页 |
| 4.1 结论 | 第71页 |
| 4.2 展望 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 附录 | 第78-79页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
