| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第13-25页 |
| 1.1 温度诱导的应激反应及其相关基因的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.1.1 热诱导应激反应相关基因及其研究进展 | 第14-15页 |
| 1.1.2 冷诱导的应激反应及其相关基因的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.2 冷诱导 RNA 结合蛋白及其功能的研究进展 | 第16-20页 |
| 1.2.1 冷诱导 RNA 结合蛋白基因结构 | 第16-17页 |
| 1.2.2 冷诱导 RNA 结合蛋白的生理功能 | 第17-20页 |
| 1.3 鱼类性别决定、性腺分化的遗传机制及其与温度变化的关系相关研究进展 | 第20-23页 |
| 1.3.1 鱼类性别决定与性腺分化机制 | 第20-21页 |
| 1.3.2 鱼类性别决定、性腺分化相关基因 | 第21-22页 |
| 1.3.3 温度的变化对鱼类性别决定、性腺分化影响的分子生物学及其表观遗传学机制 | 第22-23页 |
| 1.4 立题依据及本研究的意义 | 第23-25页 |
| 第二章 牙鲆冷诱导 RNA 结合蛋白基因（CIRP）的 cDNA 克隆及其序列分析 | 第25-43页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第26页 |
| 2.1.2 仪器试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.3 引物设计 | 第27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-34页 |
| 2.2.1 牙鲆卵巢组织的总 RNA 提取、纯化与检测 | 第27-29页 |
| 2.2.2 牙鲆卵巢总 RNA 反转录成 cDNA 第一链 | 第29-30页 |
| 2.2.3 牙鲆 CIRP 基因 cDNA 核心区段扩增 | 第30-31页 |
| 2.2.4 牙鲆卵巢 RACE 扩增模板合成及未知区域片段的 PCR 克隆 | 第31-33页 |
| 2.2.5 牙鲆 CIRP 基因 cDNA 全长序列扩增验证 | 第33页 |
| 2.2.6 牙鲆 CIRP 基因 cDNA 序列分析 | 第33-34页 |
| 2.2.7 牙鲆 CIRP 蛋白质氨基酸序列的全局比对与分子系统发生分析 | 第34页 |
| 2.3 实验结果 | 第34-41页 |
| 2.3.1 牙鲆 CIRP 基因的全长 cDNA 序列克隆及序列分析 | 第34-37页 |
| 2.3.2 牙鲆 CIRP 基因编码蛋白序列性质与二级结构分析 | 第37-38页 |
| 3.3.3 牙鲆 CIRP 蛋白与脊椎动物 CIRP 蛋白的同源性比较及系统进化树构建 | 第38-41页 |
| 2.4 讨论 | 第41-43页 |
| 第三章 牙鲆 CIRP 基因结构鉴定及其转录因子位点预测分析 | 第43-53页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第43-44页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第43页 |
| 3.1.2 仪器试剂 | 第43-44页 |
| 3.1.3 引物设计 | 第44页 |
| 3.2 实验方法 | 第44-49页 |
| 3.2.1 牙鲆肌肉组织基因组 DNA 的提取 | 第44-45页 |
| 3.2.2 牙鲆 CIRP 基因内含子克隆 | 第45-46页 |
| 3.2.3 牙鲆 CIRP 基因 5'侧翼序列克隆 | 第46-48页 |
| 3.2.4 牙鲆 CIRP 基因序列拼接和结构分析 | 第48页 |
| 3.2.5 牙鲆 CIRP 基因侧翼区转录因子结合位点的生物信息学预测与分析 | 第48-49页 |
| 3.2.6 牙鲆 CIRP 基因启动子区 CpGs 预测 | 第49页 |
| 3.3 实验结果 | 第49-52页 |
| 3.3.1 牙鲆 CIRP 基因全长序列及 5'侧翼序列克隆 | 第49-50页 |
| 3.3.2 牙鲆 CIRP 基因 5'上游转录因子结合位点分析 | 第50-51页 |
| 3.3.3 牙鲆 CIRP 基因启动子区的 CpGs 预测与分析 | 第51-52页 |
| 3.4 讨论 | 第52-53页 |
| 第四章 牙鲆 CIRP 基因的表达分析 | 第53-61页 |
| 4.1 材料与试剂 | 第53-55页 |
| 4.1.1 实验动物 | 第53-54页 |
| 4.1.2 仪器试剂 | 第54页 |
| 4.1.3 引物设计 | 第54-55页 |
| 4.2 实验方法 | 第55-57页 |
| 4.2.1 牙鲆各组织及不同胚胎发育时期总 RNA 的提取 | 第55页 |
| 4.2.2 牙鲆各组织及不同胚胎发育时期 cDNA 反转录 | 第55页 |
| 4.2.3 荧光定量 qPCR 标准曲线制备 | 第55-56页 |
| 4.2.4 牙鲆 CIRP 基因在成体组织中的表达研究 | 第56页 |
| 4.2.5 牙鲆 CIRP 基因在胚胎发育早期的表达研究 | 第56-57页 |
| 4.2.6 牙鲆 CIRP 基因表达数据分析方法 | 第57页 |
| 4.3 实验结果 | 第57-59页 |
| 4.3.1 牙鲆基因表达量检测中标准曲线的制作 | 第57页 |
| 4.3.2 牙鲆 CIRP 基因在成体组织中的表达分析 | 第57-58页 |
| 4.3.3 牙鲆 CIRP 基因在胚胎发育过程中的表达分析 | 第58-59页 |
| 4.4 讨论 | 第59-61页 |
| 第五章 牙鲆 CIRP 基因启动子 CpGs 甲基化水平的表观遗传分析 | 第61-67页 |
| 5.1 材料与试剂 | 第61-62页 |
| 5.1.1 实验动物 | 第61页 |
| 5.1.2 仪器试剂 | 第61-62页 |
| 5.1.3 引物设计 | 第62页 |
| 5.2 实验方法 | 第62-64页 |
| 5.2.1 牙鲆雌雄个体各组织基因组 DNA 提取 | 第62页 |
| 5.2.2 牙鲆基因组 DNA 亚硫酸盐处理 | 第62-63页 |
| 5.2.3 亚硫酸氢盐处理后的牙鲆基因组 DNA 的特异性 PCR 扩增 | 第63-64页 |
| 5.2.4 数据分析 | 第64页 |
| 5.3 实验结果 | 第64-65页 |
| 5.3.1 牙鲆基因组 DNA 提取 | 第64页 |
| 5.3.2 亚硫酸氢盐处理后的牙鲆基因组 DNA 的特异性 PCR 扩增 | 第64-65页 |
| 5.3.3 牙鲆雌雄个体各组织 CIRP 基因启动子甲基化水平分析 | 第65页 |
| 5.4 讨论 | 第65-67页 |
| 第六章 牙鲆 CIRP 蛋白质空间结构预测、评价分析及其表达质粒的构建 | 第67-77页 |
| 6.1 材料与试剂 | 第67-68页 |
| 6.1.1 实验动物 | 第67页 |
| 6.1.2 仪器试剂 | 第67-68页 |
| 6.1.3 引物列表 | 第68页 |
| 6.2 实验方法 | 第68-70页 |
| 6.2.1 蛋白三维空间结构预测及预测结果评价 | 第68页 |
| 6.2.2 蛋白三维预测结构与模板蛋白拟合比较 | 第68页 |
| 6.2.3 蛋白结构功能位点预测与分析 | 第68页 |
| 6.2.4 表达质粒载体构建所需引物的设计 | 第68-69页 |
| 6.2.5 ORF 区段克隆及纯化 | 第69页 |
| 6.2.6 ORF 序列与表达载体连接及验证 | 第69-70页 |
| 6.3 实验结果 | 第70-76页 |
| 6.3.1 蛋白结构预测 | 第70-71页 |
| 6.3.2 蛋白结构预测结果评价 | 第71页 |
| 6.3.3 蛋白结构预测拟合比较 | 第71-73页 |
| 6.3.4 蛋白结构功能位点预测与分析 | 第73页 |
| 6.3.5 ORF 区克隆、连接及酶切 | 第73-74页 |
| 6.3.6 表达载体构建及鉴定 | 第74-76页 |
| 6.4 讨论 | 第76-77页 |
| 结论 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-85页 |
| 致谢 | 第85-87页 |
| 个人简历 | 第87页 |
| 发表的学术论文 | 第87-88页 |
