| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 1 前言 | 第13-23页 |
| 1.1 植物细胞质雄性不育 | 第13-15页 |
| 1.2 植物microRNA的概述 | 第15-16页 |
| 1.2.1 microRNA的形成机制 | 第15页 |
| 1.2.2 植物microRNA的作用机制 | 第15-16页 |
| 1.3 miRNA的表达分析方法 | 第16-17页 |
| 1.3.1 miRNA荧光定量PCR | 第16页 |
| 1.3.2 高通量测序技术 | 第16-17页 |
| 1.4 microRNA的生物学功能 | 第17-19页 |
| 1.4.1 miR167对雄花和雌花的育性作用 | 第17-18页 |
| 1.4.2 miR394对叶片形态及生长的作用 | 第18页 |
| 1.4.3 miR156对植物生长周期转变及成花诱导作用 | 第18页 |
| 1.4.4 miR165/miR166调控花分生组织发育和花器官近远轴极性 | 第18-19页 |
| 1.5 CRISPR/Cas9系统的原理及应用 | 第19-20页 |
| 1.6 红麻雄性不育研究进展 | 第20-21页 |
| 1.7 研究目的与意义 | 第21-23页 |
| 2. 材料与方法 | 第23-46页 |
| 2.1 实验材料、仪器及试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-46页 |
| 2.2.1 红麻花药核酸的提取 | 第24-25页 |
| 2.2.2 miRNA高通量测序 | 第25-27页 |
| 2.2.3 miRNA的qRT-PCR分析 | 第27-30页 |
| 2.2.4 miR394a、miR167b、miRn20前体基因序列的克隆 | 第30-33页 |
| 2.2.5 miR394a、miR167b、miRn20过表达载体的构建 | 第33-36页 |
| 2.2.6 CRISPR/Cas9载体构建及载体活性检测 | 第36-42页 |
| 2.2.7 过表达载体对烟草的遗传转化 | 第42-45页 |
| 2.2.8 转基因烟草植株的分子检测 | 第45-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-69页 |
| 3.1 红麻花药基因组DNA和RNA的质量检测 | 第46页 |
| 3.2 microRNA的高通量测序 | 第46-58页 |
| 3.2.1 红麻花药small RNA测序数据分析 | 第46-47页 |
| 3.2.2 小RNA长度分布统计 | 第47页 |
| 3.2.3 sRNA分类注释 | 第47-48页 |
| 3.2.4 与参考基因组比对 | 第48-49页 |
| 3.2.5 获得红麻42个保守的miRNA | 第49-51页 |
| 3.2.6 发现红麻41个新的miRNA | 第51-54页 |
| 3.2.7 红麻细胞质不育系和保持系花药中差异表达的miRNA | 第54-55页 |
| 3.2.8 miRNA的靶基因预测 | 第55-56页 |
| 3.2.9 定量验证miRNA的表达量 | 第56-58页 |
| 3.3 miR394a、miR167b、miRn20前体基因序列的克隆 | 第58-60页 |
| 3.4 过表达载体构建 | 第60-61页 |
| 3.5 pYLCRISPR/Cas9-gRNA植物表达载体构建及活性检测 | 第61-66页 |
| 3.5.1 pYLCRISPR/Cas9-gRNA植物表达载体构建结果 | 第61-63页 |
| 3.5.2 红麻叶片原生质体的产量与活性 | 第63-64页 |
| 3.5.3 YLCRISPR/Cas9-gRNA载体活性检测 | 第64-66页 |
| 3.6 过表达载体对烟草的遗传转化结果 | 第66-69页 |
| 3.6.1 转基因苗的获得 | 第66-67页 |
| 3.6.2 转基因烟草植株的分子检测结果 | 第67-69页 |
| 4 讨论与结论 | 第69-74页 |
| 4.1 讨论 | 第69-72页 |
| 4.1.1 小RNA测序数据分析 | 第69-70页 |
| 4.1.2 miRNA实时荧光定量 | 第70-71页 |
| 4.1.3 过表达载体和CRISPR/Cas9载体构建 | 第71-72页 |
| 4.1.4 miR394a、miR167b、miRn20过表达载体转烟草 | 第72页 |
| 4.2 结论 | 第72-73页 |
| 4.3 创新点 | 第73页 |
| 4.4 问题和展望 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-83页 |
| 附录 | 第83-93页 |
| 研究生期间发表的学术论文 | 第93页 |
