| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 插图和附表清单 | 第13-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-25页 |
| 1.1 胚胎干细胞及诱导多能干细胞的研究现状 | 第14-18页 |
| 1.1.1 胚胎干细胞的研究现状 | 第14-15页 |
| 1.1.2 诱导多能干细胞的研究现状 | 第15-16页 |
| 1.1.3 诱导多能干细胞与免疫 | 第16-18页 |
| 1.2 胚胎干细胞的不同多能性状态 | 第18-21页 |
| 1.2.1 两种类型胚胎干细胞的来源 | 第18-19页 |
| 1.2.2 两种类型胚胎干细胞的特征 | 第19-21页 |
| 1.3 胚胎干细胞及诱导多能干细胞诱导分化为心肌细胞的研究进展 | 第21-23页 |
| 1.3.1 EB诱导法 | 第21-22页 |
| 1.3.2 单层诱导培养法 | 第22-23页 |
| 1.4 成纤维细胞转分化为心肌细胞的研究进展 | 第23-25页 |
| 1.4.1 体外转分化 | 第23-24页 |
| 1.4.2 原位转分化 | 第24-25页 |
| 第二章 猕猴成纤维细胞与MSC转分化为心肌细胞 | 第25-45页 |
| 2.1 材料与方法 | 第25-28页 |
| 2.1.1 主要实验试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.2 主要试剂的配制方法 | 第26-27页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第27-28页 |
| 2.2 主要技术路线图 | 第28页 |
| 2.3 构建GATA4质粒 | 第28-34页 |
| 2.3.1 总mRNA的提取及其反转录成cDNA | 第29页 |
| 2.3.2 RNA的反转录成cDNA | 第29-30页 |
| 2.3.3 GATA4基因的扩增与纯化 | 第30-31页 |
| 2.3.4 PCR产物与pMD19-T Vector的连接、转化与鉴定 | 第31-32页 |
| 2.3.5 PCR产物与载体的双酶切、连接、转化与鉴定 | 第32页 |
| 2.3.6 提取GATA4质粒 | 第32-34页 |
| 2.4 猕猴成纤维细胞转分化为心肌细胞 | 第34-38页 |
| 2.4.1 逆转录病毒的制备 | 第34-38页 |
| 2.4.1.1 293T细胞的准备 | 第34页 |
| 2.4.1.2 逆转录病毒的包装 | 第34-35页 |
| 2.4.1.3 逆转录病毒的浓缩 | 第35-36页 |
| 2.4.1.4 慢病毒的制备 | 第36-37页 |
| 2.4.1.5 病毒滴度测定 | 第37-38页 |
| 2.4.1.6 病毒感染猕猴成纤维细胞 | 第38页 |
| 2.5 实验结果 | 第38-43页 |
| 2.5.1 GATA4基因的扩增 | 第38-39页 |
| 2.5.2 载体PMX-FLAG的电泳结果 | 第39-40页 |
| 2.5.3 GATA4质粒的电泳图 | 第40页 |
| 2.5.4 GATA4质粒双酶切鉴定 | 第40-41页 |
| 2.5.5 猕猴成纤维细胞转分化过程 | 第41-43页 |
| 2.6 讨论 | 第43-45页 |
| 第三章 猴胚胎干细胞及诱导多能干细胞诱导分化为心肌细胞 | 第45-66页 |
| 3.1 材料与方法 | 第45-49页 |
| 3.1.1 主要实验试剂与抗体主要试剂 | 第45页 |
| 3.1.2 主要试剂的配制方法 | 第45-48页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第48-49页 |
| 3.2 主要技术路线图 | 第49页 |
| 3.3 细胞培养方法 | 第49-57页 |
| 3.3.1 CF1小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts；MEFs)的制备、培养和处理 | 第49-53页 |
| 3.3.1.1 获取CF1小鼠胚胎 | 第50页 |
| 3.3.1.2 获取CF1小鼠胚胎成纤维细胞(MEF) | 第50-51页 |
| 3.3.1.3 CF1小鼠胚胎成纤维细胞复苏、传代、冻存及运输 | 第51-53页 |
| 3.3.1.4 制备饲养层细胞 | 第53页 |
| 3.3.2 猴胚胎干细胞及诱导多能干细胞复苏、传代及冻存 | 第53-56页 |
| 3.3.2.1 猴胚胎干细胞及诱导多能干细胞复苏 | 第53-54页 |
| 3.3.2.2 猴胚胎干细胞及诱导多能干细胞传代 | 第54-55页 |
| 3.3.2.3 猴胚胎干细胞及诱导多能干细胞冻存 | 第55-56页 |
| 3.3.3 细胞计数 | 第56-57页 |
| 3.4 胚胎干细胞及诱导多能干细胞诱导分化为心肌细胞 | 第57-60页 |
| 3.4.1 胚胎干细胞及诱导多能干细胞诱导分化为心肌细胞的过程 | 第57-60页 |
| 3.4.1.1 实验材料 | 第57页 |
| 3.4.1.2 主要试剂 | 第57页 |
| 3.4.1.3 诱导分化实验分组 | 第57页 |
| 3.4.1.4 分化实验流程 | 第57-60页 |
| 3.5 免疫荧光染色技术 | 第60-61页 |
| 3.5.1 相关原理 | 第60页 |
| 3.5.2 免疫荧光染色技术的方法与步骤 | 第60-61页 |
| 3.6 实验结果 | 第61-64页 |
| 3.6.1 胚胎干细胞及诱导多能干细胞全能性的检测 | 第61页 |
| 3.6.2 诱导分化心肌细胞各阶段免疫荧光染色 | 第61-62页 |
| 3.6.3 心肌分化过程图 | 第62页 |
| 3.6.4 3-12及IPS01.1在心肌细胞跳动频率及在不同天数跳动频率的比较 | 第62-64页 |
| 3.7 讨论 | 第64-66页 |
| 第四章 总结和展望 | 第66-68页 |
| 4.1 总结 | 第66页 |
| 4.2 展望 | 第66-68页 |
| 致谢 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-78页 |
| 附录A 攻读硕士期间发表论文目录 | 第78页 |
