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PCBP1-AS1通过TRAF5介导的NF-κB信号通路调控外阴鳞癌细胞生物学行为的机制研究

摘要第4-7页
Abstract第7-10页
英文缩略语第11-20页
第一部分 PCBP1-AS1、TRAF5和NF-κB信号通路蛋白在外阴鳞状细胞癌组织中的表达及意义第20-56页
    1 前言第20-22页
    2 材料和方法第22-40页
        2.1 主要试剂和仪器第22-24页
            2.1.1 主要试剂第22-24页
            2.1.2 主要仪器第24页
        2.2 研究对象和分组第24-26页
            2.2.1 外阴鳞状细胞癌及相应的癌旁正常外阴组织标本第25页
            2.2.2 外阴上皮内非瘤样病变及相应的病变旁正常外阴组织标本的新鲜标本第25页
            2.2.3 外阴上皮内非瘤样病变及相应的病变旁正常外阴组织标本的石蜡标本第25-26页
        2.3 研究方法第26-40页
            2.3.1 引物合成第26页
            2.3.2 液体配置第26-27页
            2.3.3 组织总RNA提取第27-28页
            2.3.4 反转录合成cDNA第28-29页
            2.3.5 定量实时PCR检测第29-30页
            2.3.6 相对表达量的计算第30页
            2.3.7 VSCC组织总蛋白样品的制备第30页
            2.3.8 Bradford蛋白浓度测定法检测蛋白浓度第30-31页
            2.3.9 SDS-PAGE凝胶配制第31-33页
            2.3.10 上样与电泳第33-34页
            2.3.11 转膜第34页
            2.3.12 封闭第34页
            2.3.13 一抗孵育第34-35页
            2.3.14 二抗孵育第35页
            2.3.15 化学发光及显影第35-36页
            2.3.16 图像分析及相对表达量的计算第36页
            2.3.17 脱蜡和水化第36页
            2.3.18 抗原修复第36-37页
            2.3.19 封闭第37页
            2.3.20 一抗孵育第37-38页
            2.3.21 二抗孵育第38页
            2.3.22 DAB显色第38页
            2.3.23 复染、脱水、透明和封片第38-39页
            2.3.24 免疫组化的量化评分第39页
            2.3.25 统计学分析第39-40页
    3 结果第40-51页
        3.1 PCBP1-AS1和TRAF5mRNA在VSCC组织中均低表达第40页
        3.2 PCBP1-AS1和TRAF5mRNA在NNEDV组织中均低表达第40-41页
        3.3 PCBP1-AS1和TRAF5mRNA在VSCC和NNEDV组织中的表达关系分析第41页
        3.4 PCBP1-AS1和TRAF5mRNA在VSCC组织中的表达与患者临床病理特征的相关性分析第41-43页
        3.5 TRAF5、p65、p-p65、c-Rel和IκBα蛋白在VSCC组织中的表达第43页
        3.6 TRAF5、p65、c-Rel、IL-1β、IL-10和IL-2蛋白在NNEDV组织中的表达第43-45页
        3.7 TRAF5、p65、c-Rel和IL-1β蛋白在NNEDV组织中的表达关系分析第45-46页
        3.8 TRAF5、p65、c-Rel和IL-1β蛋白在NNEDV组织中的表达与患者临床病理特征的相关性分析第46-48页
        3.9 TRAF5、p65、c-Rel和IL-1β蛋白在NNEDV组织中的表达与患者同时合并其他免疫相关性疾病的相关性分析第48-51页
    4 讨论第51-55页
    5 结论第55-56页
第二部分 PCBP1-AS1对外阴鳞状细胞癌SW954细胞的生物学行为的影响第56-84页
    6 前言第56-57页
    7 材料与方法第57-76页
        7.1 主要试剂和仪器第57-60页
            7.1.1 主要试剂第58-59页
            7.1.2 主要仪器第59-60页
            7.1.3 实验细胞第60页
        7.2 研究对象和分组第60页
        7.3 研究方法第60-76页
            7.3.1 液体配制第61页
            7.3.2 SW954细胞培养第61-62页
            7.3.3 筛选shRNA最佳序列第62-64页
            7.3.4 转染细胞模型的构建第64-68页
            7.3.5 菌种的活化第68-69页
            7.3.6 质粒的扩增第69-70页
            7.3.7 qRT-PCR检测技术第70-71页
            7.3.8 CCK-8检测技术第71-72页
            7.3.9 AnnexinV-FITC&PI检测技术第72-73页
            7.3.10 细胞划痕实验第73-74页
            7.3.11 Transwell侵袭实验第74-75页
            7.3.12 统计学分析第75-76页
    8 结果第76-82页
        8.1 TRAF5-RNAi细胞模型的筛选与验证第76页
        8.2 转染细胞模型中PCBP1-AS1和TRAF5mRNA的表达第76-78页
        8.3 转染细胞模型中细胞增殖的检测第78-79页
        8.4 转染细胞模型中细胞凋亡的检测第79-80页
        8.5 转染细胞模型中细胞迁移的检测第80-81页
        8.6 转染细胞模型中细胞侵袭的检测第81-82页
    9 讨论第82-83页
    10 结论第83-84页
第三部分 PCBP1-AS1通过TRAF5介导的NF-κB信号通路调控外阴鳞状细胞癌SW954细胞的生物学行为第84-100页
    11 前言第84-85页
    12 材料与方法第85-89页
        12.1 主要试剂和仪器第85-87页
            12.1.1 主要试剂第85-86页
            12.1.2 主要仪器第86-87页
        12.2 研究对象和分组第87页
        12.3 研究方法第87-89页
            12.3.1 WesternBlot检测技术第87-88页
            12.3.2 NF-κB活性的检测第88-89页
            12.3.3 CCK-8检测技术第89页
            12.3.4 AnnexinV-FITC&PI检测技术第89页
            12.3.5 细胞划痕实验第89页
            12.3.6 Transwell侵袭实验第89页
            12.3.7 统计学分析第89页
    13 结果第89-98页
        13.1 转染细胞模型中TRAF5和NF-κB信号通路蛋白的表达第89-91页
        13.2 转染细胞模型中NF-κB活性的检测第91-92页
        13.3 NF-κB信号通路的激活和抑制模型的构建与验证第92-94页
        13.4 各组细胞模型中细胞增殖的检测第94页
        13.5 各组细胞模型中细胞凋亡的检测第94-95页
        13.6 各组细胞模型中细胞迁移的检测第95-97页
        13.7 各组细胞模型中细胞侵袭的检测第97-98页
    14 讨论第98-99页
    15 结论第99-100页
本研究创新性的自我评价第100-101页
参考文献第101-109页
综述第109-121页
    参考文献第115-121页
攻读学位期间取得的研究成果第121-122页
致谢第122-123页
个人简历第123页

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