| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 英文缩略语 | 第11-20页 |
| 第一部分 PCBP1-AS1、TRAF5和NF-κB信号通路蛋白在外阴鳞状细胞癌组织中的表达及意义 | 第20-56页 |
| 1 前言 | 第20-22页 |
| 2 材料和方法 | 第22-40页 |
| 2.1 主要试剂和仪器 | 第22-24页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第22-24页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第24页 |
| 2.2 研究对象和分组 | 第24-26页 |
| 2.2.1 外阴鳞状细胞癌及相应的癌旁正常外阴组织标本 | 第25页 |
| 2.2.2 外阴上皮内非瘤样病变及相应的病变旁正常外阴组织标本的新鲜标本 | 第25页 |
| 2.2.3 外阴上皮内非瘤样病变及相应的病变旁正常外阴组织标本的石蜡标本 | 第25-26页 |
| 2.3 研究方法 | 第26-40页 |
| 2.3.1 引物合成 | 第26页 |
| 2.3.2 液体配置 | 第26-27页 |
| 2.3.3 组织总RNA提取 | 第27-28页 |
| 2.3.4 反转录合成cDNA | 第28-29页 |
| 2.3.5 定量实时PCR检测 | 第29-30页 |
| 2.3.6 相对表达量的计算 | 第30页 |
| 2.3.7 VSCC组织总蛋白样品的制备 | 第30页 |
| 2.3.8 Bradford蛋白浓度测定法检测蛋白浓度 | 第30-31页 |
| 2.3.9 SDS-PAGE凝胶配制 | 第31-33页 |
| 2.3.10 上样与电泳 | 第33-34页 |
| 2.3.11 转膜 | 第34页 |
| 2.3.12 封闭 | 第34页 |
| 2.3.13 一抗孵育 | 第34-35页 |
| 2.3.14 二抗孵育 | 第35页 |
| 2.3.15 化学发光及显影 | 第35-36页 |
| 2.3.16 图像分析及相对表达量的计算 | 第36页 |
| 2.3.17 脱蜡和水化 | 第36页 |
| 2.3.18 抗原修复 | 第36-37页 |
| 2.3.19 封闭 | 第37页 |
| 2.3.20 一抗孵育 | 第37-38页 |
| 2.3.21 二抗孵育 | 第38页 |
| 2.3.22 DAB显色 | 第38页 |
| 2.3.23 复染、脱水、透明和封片 | 第38-39页 |
| 2.3.24 免疫组化的量化评分 | 第39页 |
| 2.3.25 统计学分析 | 第39-40页 |
| 3 结果 | 第40-51页 |
| 3.1 PCBP1-AS1和TRAF5mRNA在VSCC组织中均低表达 | 第40页 |
| 3.2 PCBP1-AS1和TRAF5mRNA在NNEDV组织中均低表达 | 第40-41页 |
| 3.3 PCBP1-AS1和TRAF5mRNA在VSCC和NNEDV组织中的表达关系分析 | 第41页 |
| 3.4 PCBP1-AS1和TRAF5mRNA在VSCC组织中的表达与患者临床病理特征的相关性分析 | 第41-43页 |
| 3.5 TRAF5、p65、p-p65、c-Rel和IκBα蛋白在VSCC组织中的表达 | 第43页 |
| 3.6 TRAF5、p65、c-Rel、IL-1β、IL-10和IL-2蛋白在NNEDV组织中的表达 | 第43-45页 |
| 3.7 TRAF5、p65、c-Rel和IL-1β蛋白在NNEDV组织中的表达关系分析 | 第45-46页 |
| 3.8 TRAF5、p65、c-Rel和IL-1β蛋白在NNEDV组织中的表达与患者临床病理特征的相关性分析 | 第46-48页 |
| 3.9 TRAF5、p65、c-Rel和IL-1β蛋白在NNEDV组织中的表达与患者同时合并其他免疫相关性疾病的相关性分析 | 第48-51页 |
| 4 讨论 | 第51-55页 |
| 5 结论 | 第55-56页 |
| 第二部分 PCBP1-AS1对外阴鳞状细胞癌SW954细胞的生物学行为的影响 | 第56-84页 |
| 6 前言 | 第56-57页 |
| 7 材料与方法 | 第57-76页 |
| 7.1 主要试剂和仪器 | 第57-60页 |
| 7.1.1 主要试剂 | 第58-59页 |
| 7.1.2 主要仪器 | 第59-60页 |
| 7.1.3 实验细胞 | 第60页 |
| 7.2 研究对象和分组 | 第60页 |
| 7.3 研究方法 | 第60-76页 |
| 7.3.1 液体配制 | 第61页 |
| 7.3.2 SW954细胞培养 | 第61-62页 |
| 7.3.3 筛选shRNA最佳序列 | 第62-64页 |
| 7.3.4 转染细胞模型的构建 | 第64-68页 |
| 7.3.5 菌种的活化 | 第68-69页 |
| 7.3.6 质粒的扩增 | 第69-70页 |
| 7.3.7 qRT-PCR检测技术 | 第70-71页 |
| 7.3.8 CCK-8检测技术 | 第71-72页 |
| 7.3.9 AnnexinV-FITC&PI检测技术 | 第72-73页 |
| 7.3.10 细胞划痕实验 | 第73-74页 |
| 7.3.11 Transwell侵袭实验 | 第74-75页 |
| 7.3.12 统计学分析 | 第75-76页 |
| 8 结果 | 第76-82页 |
| 8.1 TRAF5-RNAi细胞模型的筛选与验证 | 第76页 |
| 8.2 转染细胞模型中PCBP1-AS1和TRAF5mRNA的表达 | 第76-78页 |
| 8.3 转染细胞模型中细胞增殖的检测 | 第78-79页 |
| 8.4 转染细胞模型中细胞凋亡的检测 | 第79-80页 |
| 8.5 转染细胞模型中细胞迁移的检测 | 第80-81页 |
| 8.6 转染细胞模型中细胞侵袭的检测 | 第81-82页 |
| 9 讨论 | 第82-83页 |
| 10 结论 | 第83-84页 |
| 第三部分 PCBP1-AS1通过TRAF5介导的NF-κB信号通路调控外阴鳞状细胞癌SW954细胞的生物学行为 | 第84-100页 |
| 11 前言 | 第84-85页 |
| 12 材料与方法 | 第85-89页 |
| 12.1 主要试剂和仪器 | 第85-87页 |
| 12.1.1 主要试剂 | 第85-86页 |
| 12.1.2 主要仪器 | 第86-87页 |
| 12.2 研究对象和分组 | 第87页 |
| 12.3 研究方法 | 第87-89页 |
| 12.3.1 WesternBlot检测技术 | 第87-88页 |
| 12.3.2 NF-κB活性的检测 | 第88-89页 |
| 12.3.3 CCK-8检测技术 | 第89页 |
| 12.3.4 AnnexinV-FITC&PI检测技术 | 第89页 |
| 12.3.5 细胞划痕实验 | 第89页 |
| 12.3.6 Transwell侵袭实验 | 第89页 |
| 12.3.7 统计学分析 | 第89页 |
| 13 结果 | 第89-98页 |
| 13.1 转染细胞模型中TRAF5和NF-κB信号通路蛋白的表达 | 第89-91页 |
| 13.2 转染细胞模型中NF-κB活性的检测 | 第91-92页 |
| 13.3 NF-κB信号通路的激活和抑制模型的构建与验证 | 第92-94页 |
| 13.4 各组细胞模型中细胞增殖的检测 | 第94页 |
| 13.5 各组细胞模型中细胞凋亡的检测 | 第94-95页 |
| 13.6 各组细胞模型中细胞迁移的检测 | 第95-97页 |
| 13.7 各组细胞模型中细胞侵袭的检测 | 第97-98页 |
| 14 讨论 | 第98-99页 |
| 15 结论 | 第99-100页 |
| 本研究创新性的自我评价 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-109页 |
| 综述 | 第109-121页 |
| 参考文献 | 第115-121页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第121-122页 |
| 致谢 | 第122-123页 |
| 个人简历 | 第123页 |
