| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 1 文献综述 | 第11-19页 |
| 1.1 BVDV简介 | 第11页 |
| 1.2 BVDV生物学特性 | 第11-15页 |
| 1.2.1 BVDV病原学 | 第11-12页 |
| 1.2.2 BVDV的分型 | 第12页 |
| 1.2.3 E2蛋白结构功能 | 第12-13页 |
| 1.2.4 BVD类型及临床诊断 | 第13-15页 |
| 1.3 BVDV酶联免疫吸附试验的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.3.1 酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第15-16页 |
| 1.4 流行病学 | 第16-17页 |
| 1.5 BVDV防控和根除 | 第17页 |
| 1.6 原核表达系统的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.7 研究目的和意义 | 第18-19页 |
| 2 BVDVE2蛋白的原核表达和纯化 | 第19-33页 |
| 2.1 材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 病毒 | 第19页 |
| 2.1.2 质粒和菌种 | 第19页 |
| 2.1.3 试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.4 仪器 | 第20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-27页 |
| 2.2.1 引物设计及合成 | 第20-21页 |
| 2.2.2 细胞RNA的提取 | 第21页 |
| 2.2.3 cDNA合成的操作方法 | 第21页 |
| 2.2.4 E2基因扩增 | 第21页 |
| 2.2.5 BVDVE2扩增基因凝胶回收 | 第21-22页 |
| 2.2.6 目的基因与pMD18-T载体连接 | 第22页 |
| 2.2.7 pMD18-T-E2转化E.coliDH5α感受态细胞 | 第22-23页 |
| 2.2.8 pMD18-T-E2重组质粒的酶切鉴定 | 第23页 |
| 2.2.9 基因的序列测定与分析 | 第23页 |
| 2.2.10 BVDVE2基因原核表达载体构建 | 第23-24页 |
| 2.2.11 重组质粒pET28a-E2的表达与纯化 | 第24-27页 |
| 2.3 实验结果 | 第27-30页 |
| 2.3.1 BVDVE2基因PCR结果 | 第27页 |
| 2.3.2 重组质粒pMD18-T-E2的鉴定与测序结果 | 第27-28页 |
| 2.3.3 pET28a-E2重组质粒的鉴定 | 第28页 |
| 2.3.4 重组蛋白的诱导表达及鉴定 | 第28-29页 |
| 2.3.5 目的蛋白的纯化 | 第29-30页 |
| 2.3.6 目的蛋白的Westernblot分析 | 第30页 |
| 2.4 讨论 | 第30-31页 |
| 2.5 小结 | 第31-33页 |
| 3 BVDVE2基因间接ELISA检测方法的建立 | 第33-43页 |
| 3.1 材料 | 第33页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第33页 |
| 3.2 方法 | 第33-36页 |
| 3.2.1 酶标板均一性的确定 | 第33页 |
| 3.2.2 ELISA初步操作步骤的确定 | 第33-34页 |
| 3.2.3 间接ELISA试验条件的优化 | 第34-36页 |
| 3.3 结果 | 第36-41页 |
| 3.3.1 最佳反应条件的选择 | 第36-40页 |
| 3.3.2 重复性试验 | 第40-41页 |
| 3.3.3 与商品化试剂盒的比较试验 | 第41页 |
| 3.4 讨论 | 第41-42页 |
| 3.5 小结 | 第42-43页 |
| 4 结论 | 第43-45页 |
| 参考文献 | 第45-53页 |
| 致谢 | 第53-55页 |
| 个人简历 | 第55页 |
