| 摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACT | 第12-13页 |
| 缩略语 (Abbreviation) | 第14-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-52页 |
| 1 脂肪生物学 | 第16-31页 |
| 1.1 脂肪细胞的起源 | 第16-17页 |
| 1.2 脂肪的生成与分化调控 | 第17-26页 |
| 1.2.1 脂肪细胞发生过程 | 第17-18页 |
| 1.2.2 脂肪细胞分化调控 | 第18-26页 |
| 1.3 脂肪组织作为重要的内分泌器官 | 第26-28页 |
| 1.4 肥胖引起的慢性炎症与代谢紊乱 | 第28-31页 |
| 1.4.1 肥胖病与炎症 | 第28-29页 |
| 1.4.2 脂肪细胞机能障碍与炎症 | 第29-31页 |
| 2 脂联素研究进展 | 第31-52页 |
| 2.1 脂联素的发现 | 第31-32页 |
| 2.2 脂联素基因结构及其转录调控 | 第32-34页 |
| 2.3 脂联素的分子结构及其多态性 | 第34-37页 |
| 2.4 脂联素的表达与分泌 | 第37-40页 |
| 2.4.1 脂联素的表达 | 第37-38页 |
| 2.4.2 脂联素的分泌及其调控 | 第38-40页 |
| 2.5 脂联素受体 | 第40-42页 |
| 2.6 脂联素参与的细胞代谢调控 | 第42-48页 |
| 2.6.1 APPL1 | 第42-43页 |
| 2.6.2 脂联素信号途径中APPL1的作用 | 第43页 |
| 2.6.3 AMPK途径 | 第43-45页 |
| 2.6.4 MAPK途径 | 第45-46页 |
| 2.6.5 PPAR信号途径 | 第46页 |
| 2.6.6 NF-κB途径 | 第46-47页 |
| 2.6.7 环氧化酶-2(COX-2) | 第47页 |
| 2.6.8 Caspase信号 | 第47-48页 |
| 2.7 脂联素信号途径和胰岛素信号途径的对话 | 第48-52页 |
| 第二章 猪ERp44和ERO1-Lα基因的克隆与表达分析 | 第52-68页 |
| 1 前言 | 第52页 |
| 2 材料与方法 | 第52-61页 |
| 2.1 实验材料 | 第52-53页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第52页 |
| 2.1.2 样品采集 | 第52页 |
| 2.1.3 菌株 | 第52-53页 |
| 2.2 主要仪器、试剂及溶液配制 | 第53-54页 |
| 2.2.1 主要仪器 | 第53页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第53-54页 |
| 2.2.3 主要溶液配制 | 第54页 |
| 2.2.4 分子生物学及相关软件 | 第54页 |
| 2.3 实验方法 | 第54-61页 |
| 2.3.1 组织样品总RNA提取 | 第54-55页 |
| 2.3.2 总RNA纯化 | 第55页 |
| 2.3.3 总RNA纯度鉴定 | 第55页 |
| 2.3.4 目标片段的扩增与纯化 | 第55-59页 |
| 2.3.5 基因组织表达谱分析 | 第59-61页 |
| 3 结果与分析 | 第61-67页 |
| 3.1 猪ERp44和ERO1-Lα基因全长cDNA的克隆与序列分析 | 第61-65页 |
| 3.1.1 猪ERp44和ERO1-Lα基因全编码区cDNA的克隆 | 第61-62页 |
| 3.1.2 猪ERp44和ERO1-Lα基因进化与蛋白质分析 | 第62-65页 |
| 3.2 猪ERp44和ERO1-Lα基因组结构分析 | 第65页 |
| 3.3 猪ERp44和ERO1-Lα基因的染色体定位 | 第65页 |
| 3.4 猪ERp44和ERO1-Lα基因的组织表达分析 | 第65-67页 |
| 4 讨论 | 第67-68页 |
| 第三章 PPAR7通过抑制ERp44转录增加脂联素分泌 | 第68-100页 |
| 1 前言 | 第68页 |
| 2 材料与方法 | 第68-84页 |
| 2.1 实验材料 | 第68-70页 |
| 2.1.1 试验动物和细胞系 | 第68-69页 |
| 2.1.2 载体 | 第69-70页 |
| 2.2 主要仪器、试剂和溶液的配制 | 第70-73页 |
| 2.2.1 主要仪器、试剂和溶液配制 | 第70页 |
| 2.2.2 其他仪器和试剂 | 第70页 |
| 2.2.3 溶液配制 | 第70-73页 |
| 2.3 实验方法 | 第73-84页 |
| 2.3.1 基因组DNA的提取 | 第73-74页 |
| 2.3.2 ERp44基因启动子的扩增 | 第74页 |
| 2.3.3 载体构建 | 第74-75页 |
| 2.3.4 脂联素多克隆抗体的制备 | 第75-77页 |
| 2.3.5 质粒DNA的大量提取 | 第77-78页 |
| 2.3.6 质粒浓度和纯度的检测 | 第78页 |
| 2.3.7 细胞的培养 | 第78页 |
| 2.3.8 细胞转染 | 第78-79页 |
| 2.3.9 脂联素基因稳定转染细胞的筛选 | 第79页 |
| 2.3.10 细胞总RNA提取、纯化和反转录 | 第79-81页 |
| 2.3.11 实时定量PCR | 第81页 |
| 2.3.12 Western blot | 第81-82页 |
| 2.3.13 双荧光素酶报告基因检测 | 第82-83页 |
| 2.3.14 染色质免疫共沉淀(ChIP) | 第83-84页 |
| 2.3.15 试验数据统计分析 | 第84页 |
| 3 结果与分析 | 第84-98页 |
| 3.1 脂联素抗体的制备与抗体效价的检测 | 第84-86页 |
| 3.1.1 重组脂联素的诱导表达 | 第84-85页 |
| 3.1.2 重组GST-脂联素蛋白的纯化 | 第85页 |
| 3.1.3 抗体的制备和效价测定 | 第85-86页 |
| 3.2 稳定转染全长脂联素的HEK293细胞的筛选与鉴定 | 第86-88页 |
| 3.2.1 G418筛选浓度的确定 | 第86页 |
| 3.2.2 稳定转染脂联素基因的HEK293细胞的筛选 | 第86页 |
| 3.2.3 稳定转染细胞株的检测 | 第86-88页 |
| 3.3 猪ERp44基因启动子的克隆与及顺式作用元件分析 | 第88-89页 |
| 3.4 猪ERp44启动子活性及功能分析 | 第89-91页 |
| 3.5 PPARγ对ERp44基因的转录调控 | 第91-95页 |
| 3.5.1 PPARγ对截短ERp44启动子活性的影响 | 第91-92页 |
| 3.5.2 PPARγ对ERp44启动子结合位点的依赖性 | 第92-93页 |
| 3.5.3 ERp44启动子受PPARγ抑制的浓度依赖性 | 第93-94页 |
| 3.5.4 PPARγ的抑制剂可回复PPARγ对ERp44启动子活性的下调作用 | 第94-95页 |
| 3.6 PPARγ对ERp44启动子的结合作用 | 第95-96页 |
| 3.7 PPARγ通过抑制ERp44的转录增加脂联素的分泌 | 第96-98页 |
| 4 讨论 | 第98-100页 |
| 第四章 猪MSCs细胞的成脂分化及KLF15对脂联素表达调控 | 第100-120页 |
| 1 前言 | 第100-101页 |
| 2 材料与方法 | 第101-106页 |
| 2.1 实验材料 | 第101页 |
| 2.1.1 试验动物和细胞系 | 第101页 |
| 2.1.2 载体 | 第101页 |
| 2.2 主要仪器、试剂和溶液的配制 | 第101页 |
| 2.2.1 主要仪器、试剂和溶液配制 | 第101页 |
| 2.2.2 其他仪器和试剂 | 第101页 |
| 2.2.3 其他溶液配制 | 第101页 |
| 2.3 实验方法 | 第101-106页 |
| 2.3.1 猪骨髓间充质细胞的分离、纯化和培养 | 第101-102页 |
| 2.3.2 猪骨髓间充质细胞成脂分化 | 第102页 |
| 2.3.3 脂肪细胞的油红O染色 | 第102页 |
| 2.3.4 细胞转染 | 第102页 |
| 2.3.5 细胞RNA提取、纯化和反转录 | 第102页 |
| 2.3.6 载体构建 | 第102-104页 |
| 2.3.7 质粒DNA的大量提取 | 第104页 |
| 2.3.8 质粒浓度和纯度的检测 | 第104页 |
| 2.3.9 实时定量PCR | 第104-105页 |
| 2.3.10 双荧光素酶报告基因检测 | 第105页 |
| 2.3.11 染色质免疫共沉淀(ChIP) | 第105页 |
| 2.3.12 试验数据统计分析 | 第105-106页 |
| 3 结果与分析 | 第106-118页 |
| 3.1 猪骨髓间充质干细胞 | 第106-107页 |
| 3.1.1 猪骨髓间充质干细胞的分离和培养 | 第106页 |
| 3.1.2 间充质干细胞标记基因的检测 | 第106-107页 |
| 3.2 猪骨髓间充质干细胞的成脂分化 | 第107-109页 |
| 3.3 猪间充质干细胞分化过程中脂联素的表达 | 第109-110页 |
| 3.4 猪脂联素基因启动子的克隆与分析 | 第110-111页 |
| 3.5 KLF15对猪脂联素基因启动子活性的影响 | 第111-113页 |
| 3.6 KLF15对脂联素启动子结合位点的依赖性 | 第113-114页 |
| 3.7 脂联素启动子受KLF15激活的浓度依赖性 | 第114-115页 |
| 3.8 KLF15及其负显性抑制体AKLF15对脂联素基因的调控 | 第115-117页 |
| 3.9 KLF15对脂联素启动子的结合作用 | 第117-118页 |
| 4 讨论 | 第118-120页 |
| 第五章 结论与创新点 | 第120-122页 |
| 结论 | 第120-121页 |
| 创新点 | 第121-122页 |
| 参考文献 | 第122-146页 |
| 研究生期间论文发表情况 | 第146-148页 |
| 致谢 | 第148页 |
