| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-26页 |
| 1.1 灵杆菌概述 | 第11-14页 |
| 1.1.1 灵杆菌脂多糖 | 第11-12页 |
| 1.1.2 灵杆菌素 | 第12-13页 |
| 1.1.3 灵杆菌几丁质酶 | 第13-14页 |
| 1.1.4 其它 | 第14页 |
| 1.2 核酸酶 | 第14-19页 |
| 1.2.1 常用的核酸酶 | 第15-17页 |
| 1.2.2 具有抗肿瘤作用的核酸酶 | 第17-19页 |
| 1.3 灵杆菌非特异性核酸酶 | 第19-24页 |
| 1.3.1 灵杆菌非特异性核酸酶的理化性质 | 第19-21页 |
| 1.3.2 灵杆菌核酸酶的表达调控 | 第21页 |
| 1.3.3 灵杆菌核酸酶的结构研究 | 第21-22页 |
| 1.3.4 灵杆菌核酸酶的催化机制 | 第22-23页 |
| 1.3.5 灵杆菌核酸酶的应用 | 第23-24页 |
| 1.4 选题的目的、意义及主要研究内容 | 第24-26页 |
| 1.4.1 选题的目的、意义 | 第24-25页 |
| 1.4.2 主要研究内容 | 第25-26页 |
| 第二章 灵杆菌非特异性核酸酶分泌表达载体的构建 | 第26-33页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第26-28页 |
| 2.1.1 菌种与质粒 | 第26-27页 |
| 2.1.2 工具酶和主要药品 | 第27页 |
| 2.1.3 主要溶液的配方 | 第27-28页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-30页 |
| 2.2.1 TSS 法大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第28页 |
| 2.2.2 灵杆菌非特异性核酸酶分泌表达载体的构建 | 第28-29页 |
| 2.2.3 SDS-PAGE 电泳 | 第29-30页 |
| 2.2.4 NU 蛋白的诱导表达 | 第30页 |
| 2.3 结果与分析 | 第30-32页 |
| 2.3.1 灵杆菌非特异性核酸酶分泌表达载体的构建 | 第30-32页 |
| 2.3.2 NU 蛋白的诱导表达（T7 表达系统） | 第32页 |
| 2.4 讨论 | 第32-33页 |
| 第三章 灵杆菌非特异性核酸酶胞内表达载体的构建及表达优化 | 第33-39页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第33页 |
| 3.1.1 菌种与质粒 | 第33页 |
| 3.1.2 工具酶和主要药品 | 第33页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第33页 |
| 3.2 实验方法 | 第33-34页 |
| 3.2.1 灵杆菌核酸酶原核表达载体的构建 | 第33-34页 |
| 3.2.2 序列分析 | 第34页 |
| 3.2.3 MBP-NU 融合蛋白的诱导表达 | 第34页 |
| 3.3 结果与分析 | 第34-38页 |
| 3.3.1 灵杆菌核酸酶原核表达载体的构建 | 第34-35页 |
| 3.3.2 灵杆菌核酸酶的序列分析 | 第35-36页 |
| 3.3.3 MBP-NU 融合蛋白的诱导表达 | 第36-38页 |
| 3.4 讨论 | 第38-39页 |
| 第四章 灵杆菌核酸酶的纯化与活性分析 | 第39-50页 |
| 4.1 材料与试剂 | 第39-40页 |
| 4.1.1 工具酶和主要药品 | 第39页 |
| 4.1.2 主要溶液的配方 | 第39-40页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第40页 |
| 4.2 实验方法 | 第40-42页 |
| 4.2.1 融合蛋白的纯化 | 第40-41页 |
| 4.2.2 纯化 MBP-NU 融合蛋白的保存 | 第41页 |
| 4.2.3 MBP-NU 融合蛋白的活性检测 | 第41页 |
| 4.2.4 EDTA 和PMSF 对MBP-NU 活性的影响 | 第41页 |
| 4.2.5 温度、pH 和盐浓度对MBP-NU 活性的影响 | 第41-42页 |
| 4.2.6 Mg~(2+)浓度对 MBP-NU 活性的影响 | 第42页 |
| 4.2.7 β-巯基乙醇对 MBP-NU 活性的影响 | 第42页 |
| 4.2.8 纯化的 MBP-NU 中蛋白酶活性的检测 | 第42页 |
| 4.2.9 纯化的 MBP-NU 与商业化的 Benzonase 的活性比较 | 第42页 |
| 4.2.10 纯化的 MBP-NU 的去核酸效果检测 | 第42页 |
| 4.3 结果与分析 | 第42-48页 |
| 4.3.1 融合蛋白的纯化 | 第42-43页 |
| 4.3.2 MBP-NU 融合蛋白的活性检测 | 第43-44页 |
| 4.3.3 EDTA 和PMSF 对MBP-NU 活性的影响 | 第44页 |
| 4.3.4 温度、pH 和盐浓度对 MBP-NU 活性的影响 | 第44-45页 |
| 4.3.5 Mg2+浓度对 MBP-NU 活性的影响 | 第45-46页 |
| 4.3.6 β-巯基乙醇对 MBP-NU 活性的影响 | 第46页 |
| 4.3.7 纯化的 MBP-NU 中蛋白酶活性的检测 | 第46-47页 |
| 4.3.8 纯化的 MBP-NU 与商业化产品 Benzonase 的活性比较 | 第47-48页 |
| 4.3.9 纯化的 MBP-NU 的去核酸效果检测 | 第48页 |
| 4.4 讨论 | 第48-50页 |
| 第五章 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-59页 |
| 缩略词 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 作者简介 | 第61页 |
