| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略表 | 第11-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-26页 |
| 一、 TRAIL 的研究进展 | 第12-17页 |
| 1.1 TRAIL 结构及其功能 | 第12-13页 |
| 1.2 TRAIL 受体 | 第13-14页 |
| 1.3 TRAIL 诱导细胞凋亡机制 | 第14-15页 |
| 1.4 重组TRAIL 国内外研究现状 | 第15-16页 |
| 1.5 TRAIL 在肿瘤治疗中的应用 | 第16-17页 |
| 二、 动物细胞大规模培养技术概况 | 第17-22页 |
| 2.1 动物细胞大规模培养技术应用 | 第17-18页 |
| 2.2 动物细胞大规模培养问题及对策 | 第18-20页 |
| 2.3 促蛋白表达策略 | 第20-22页 |
| 三、 无血清培养基的发展及CHO 细胞培养 | 第22-24页 |
| 3.1 无血清培养基的发展 | 第22-23页 |
| 3.2 无血清培养基的组成及其主要补充因子 | 第23页 |
| 3.3 CHO 细胞的无血清培养 | 第23-24页 |
| 四、 本课题立题依据、目的、主要内容 | 第24-26页 |
| 第二章 CHO 工程细胞的大规模培养 | 第26-40页 |
| 前言 | 第26页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-28页 |
| 2.1.1 细胞株 | 第26页 |
| 2.1.2 培养基 | 第26页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.4 材料和仪器 | 第27页 |
| 2.1.5 主要溶液配方 | 第27-28页 |
| 2.2 细胞培养方法 | 第28-29页 |
| 2.2.1 细胞复苏 | 第28页 |
| 2.2.2 换液 | 第28页 |
| 2.2.3 传代 | 第28-29页 |
| 2.2.4 细胞冻存 | 第29页 |
| 2.3 CHO-TFc 无血清驯化培养 | 第29-30页 |
| 2.3.1 逐步降血清 | 第29-30页 |
| 2.3.2 直接降血清 | 第30页 |
| 2.3.3 无血清培养条件优化 | 第30页 |
| 2.4 CHO-TFc 分批补料式培养 | 第30-32页 |
| 2.4.1 种子细胞培养 | 第30页 |
| 2.4.2 5L 反应器培养 | 第30-31页 |
| 2.4.2 反应器参数操作及控制 | 第31-32页 |
| 2.5 分析方法 | 第32-33页 |
| 2.5.1 细胞计数 | 第32页 |
| 2.5.2 葡萄糖浓度测定 | 第32-33页 |
| 2.5.3 融合蛋白表达量测定 | 第33页 |
| 2.6 结果 | 第33-37页 |
| 2.6.1 细胞无血清驯化过程 | 第33-34页 |
| 2.6.2 无血清培养条件优化 | 第34-35页 |
| 2.6.3 细胞5L 反应器分批补料式培养 | 第35-37页 |
| 2.7 讨论 | 第37-40页 |
| 第三章 TRAIL-Fc 纯化工艺 | 第40-52页 |
| 前言 | 第40页 |
| 3.1 实验材料 | 第40-43页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第40页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第40-41页 |
| 3.1.3 主要试剂配制 | 第41-43页 |
| 3.2 方法 | 第43页 |
| 3.2.1 超滤、浓缩 | 第43页 |
| 3.2.2 Protein A 亲和层析纯化 | 第43页 |
| 3.2.3 CM Sepharose f.f 层析实验法 | 第43页 |
| 3.3 纯化蛋白理化性质检测 | 第43-47页 |
| 3.3.1 SDS-PAGE 凝胶电泳检测 | 第43-44页 |
| 3.3.2 蛋白含量测定 Lowry 法 | 第44-45页 |
| 3.3.3 分子量测定 | 第45页 |
| 3.3.4 Western Blotting 检测 | 第45-46页 |
| 3.3.5 糖基化检测 | 第46-47页 |
| 3.4 结果及讨论 | 第47-50页 |
| 3.4.1 超滤 | 第47页 |
| 3.4.2 融合蛋白的Protein A 亲和柱层析 | 第47-48页 |
| 3.4.3 融合蛋白的CM 柱层析 | 第48页 |
| 3.4.4 分子量结果 | 第48-49页 |
| 3.4.5 免疫印迹结果 | 第49-50页 |
| 3.4.6 糖基化分析 | 第50页 |
| 3.5 讨论 | 第50-52页 |
| 第四章 TRAIL-Fc 的活性检测 | 第52-60页 |
| 前言 | 第52页 |
| 4.1 实验材料 | 第52-53页 |
| 4.1.1 细胞株 | 第52页 |
| 4.1.2 试剂 | 第52页 |
| 4.1.3 材料和仪器 | 第52页 |
| 4.1.4 实验动物 | 第52-53页 |
| 4.2 方法 | 第53-54页 |
| 4.2.1 体外抗肿瘤活性 | 第53页 |
| 4.2.2 体内抗肿瘤活性 | 第53-54页 |
| 4.3 结果 | 第54-57页 |
| 4.3.1 TRAIL-Fc 融合蛋白的体外抗肿瘤活性 | 第54-55页 |
| 4.3.2 TRAIL-Fc 融合蛋白的体内抗肿瘤活性 | 第55-57页 |
| 4.4 讨论 | 第57-60页 |
| 第五章 结论 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-65页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文及取得的研究成果 | 第65页 |
