| 致谢 | 第6-10页 |
| 摘要 | 第10-13页 |
| Abstract | 第13-16页 |
| 第一章 文献综述和研究背景 | 第17-39页 |
| 1. 柑橘黑斑病的研究背景 | 第17-27页 |
| 1.1 柑橘黑斑病的发生历史、国内外分布和危害性 | 第17-20页 |
| 1.1.1 病害的国内外发生历史 | 第17页 |
| 1.1.2 病害的分布 | 第17-18页 |
| 1.1.3 病害的危害性及病害在我国的研究进展 | 第18-20页 |
| 1.1.3.1 病害的危害性 | 第18-19页 |
| 1.1.3.2 病害在我国的研究进展 | 第19-20页 |
| 1.2 柑橘黑斑病的症状特点 | 第20页 |
| 1.3 柑橘黑斑病的病原种类 | 第20-23页 |
| 1.3.1 柑橘叶点霉菌(P.citricarpa)和首都叶点霉菌(P.capitalensis) | 第20-21页 |
| 1.3.2 亚洲柑橘叶点霉菌P.citriasiana | 第21-22页 |
| 1.3.3 巴西柑橘叶点霉菌(P.citribraziliensis) | 第22-23页 |
| 1.4 病害的发生规律 | 第23-24页 |
| 1.4.1 病害的初侵染来源 | 第23-24页 |
| 1.4.2 病害的传播 | 第24页 |
| 1.4.3 气候条件对病害流行的作用 | 第24页 |
| 1.5 病害的诊断与检测 | 第24-25页 |
| 1.6 病害的风险 | 第25-26页 |
| 1.7 病害的防治 | 第26-27页 |
| 2、叶点霉属真菌的研究进展 | 第27-30页 |
| 2.1 叶点霉属的建立和演变 | 第27页 |
| 2.2 叶点霉属真菌种的分类和种类 | 第27-29页 |
| 2.2.1 叶点霉属真菌种的分类依据 | 第27-28页 |
| 2.2.2 叶点霉属的种类 | 第28-29页 |
| 2.3 叶点霉属和球座菌属真菌命名 | 第29-30页 |
| 3、植物病原菌的分子快速诊断技术的研究进展 | 第30-32页 |
| 3.1 核糖体DNA的转录间隔区序列的应用 | 第30-31页 |
| 3.2 特异性扩增核糖体DNA内转录间隔区PCR技术及应用 | 第31-32页 |
| 4、植物病原真菌的种群遗传多样性及其研究技术 | 第32-37页 |
| 4.1 物种遗传多样性形成的原因及研究的意义 | 第32-33页 |
| 4.1.1 物种遗传多样性形成的原因 | 第32-33页 |
| 4.1.2 研究物种遗传多样性的意义 | 第33页 |
| 4.2 研究遗传多样性的方法 | 第33-35页 |
| 4.3 分子标记技术在叶点霉属真菌中的应用 | 第35-37页 |
| 5、本研究的背景、意义和研究内容 | 第37-39页 |
| 第二章 中国柑橘黑斑病菌及其叶点霉属真菌的种类 | 第39-86页 |
| 1. 前言 | 第39-42页 |
| 2. 材料与方法 | 第42-47页 |
| 2.1 试验材料 | 第42页 |
| 2.2. 试验方法 | 第42-47页 |
| 2.2.1 菌株分离纯化 | 第42页 |
| 2.2.2 病原菌形态与培养性状 | 第42页 |
| 2.2.3 基因组DNA的提取 | 第42-43页 |
| 2.2.4 PCR扩增、克隆、测序和引物设计 | 第43-44页 |
| 2.2.5 引物筛选与引物特异性检验 | 第44页 |
| 2.2.6 特异性引物的灵敏度检验 | 第44页 |
| 2.2.7 果园疑似柚黑斑病症状的病斑检测 | 第44-45页 |
| 2.2.8 种特异性引物鉴定病原菌 | 第45页 |
| 2.2.9 代表性菌株系统进化树的构建 | 第45页 |
| 2.2.10 温度对四种叶点霉属真菌的生长影响 | 第45-46页 |
| 2.2.11 生物化学特性 | 第46-47页 |
| 2.2.11.1 四种叶点霉属真菌对碳源利用比较 | 第46页 |
| 2.2.11.2 四种叶点霉属真菌对氮源利用比较 | 第46页 |
| 2.2.11.3 四种叶点霉属真菌对pH的反应比较 | 第46-47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-83页 |
| 3.1 分离结果 | 第47页 |
| 3.2 供试菌株的形态学鉴定 | 第47-51页 |
| 3.3 P.citricarpa、P.capitalensis和P.citriasiana ITS序列测定与分析及引物设计 | 第51-53页 |
| 3.4 引物筛选结果 | 第53页 |
| 3.5 灵敏度检测结果 | 第53页 |
| 3.6 特异性引物对果实病斑中亚洲柑橘叶点霉菌的检验 | 第53-54页 |
| 3.7 种特异性引物对分离菌株的鉴定结果 | 第54-57页 |
| 3.8 系统进化树的构建 | 第57-68页 |
| 3.8.1 基于ITS序列构建的系统进化树 | 第57-63页 |
| 3.8.2 基于肌动蛋白基因ACT构建的系统进化树 | 第63页 |
| 3.8.3 基于延长因子基因TEF1序列构建的系统进化树 | 第63-66页 |
| 3.8.4 基于β-微管蛋白基因Tub和钙调蛋白基因Cal构建的系统进化树 | 第66页 |
| 3.8.5 基于ITS,ACT和TEF1基因组合序列构建的系统进化树 | 第66-68页 |
| 3.9 叶点霉属新种Phyllosticta citrichinaensis的形态学描述 | 第68-73页 |
| 3.10 四种叶点霉属菌株在不同培养基上的培养性状 | 第73-75页 |
| 3.11 三种叶点霉属菌株在果实或叶片上引起的症状 | 第75-79页 |
| 3.11.1 P.citrichinaensis在柑橘果实和叶片上产生的症状 | 第75页 |
| 3.11.2 P.citricarpa在宽皮柑橘、甜橙和柠檬果实上引起的症状 | 第75页 |
| 3.11.3 P.citriasiana在柚果实和叶片上引起的症状 | 第75-79页 |
| 3.12 P.citrichinaensis、P.citricarpa、P.citriasiana和P.capitalensis生长温度 | 第79页 |
| 3.13 四种叶点霉属菌株生物学特性 | 第79-83页 |
| 3.13.1 四种叶点霉属菌株对不同碳源的利用情况 | 第79页 |
| 3.13.2 四种不同叶点霉属菌株对氮源的利用 | 第79-80页 |
| 3.13.3 四种叶点霉属菌株在不同pH培养基上生长状况 | 第80-83页 |
| 4 结论与讨论 | 第83-86页 |
| 第三章 鉴定柑橘上三种叶点霉属真菌的特异性引物筛选和巢式四重PCR鉴定体系建立 | 第86-100页 |
| 1. 前言 | 第86-88页 |
| 2. 材料与方法 | 第88-92页 |
| 2.1 供试菌株及其培养 | 第88页 |
| 2.2 基因组DNA的提取 | 第88页 |
| 2.3 P.citricarpa,P.citrichinaensis和P.capitalensis特异性引物的设计 | 第88-91页 |
| 2.4 P.citricarpa,P.citrichinaensis和P.capitalensis引物的特异性检测及目的条带的克隆 | 第91页 |
| 2.5 特异性引物灵敏度检验 | 第91页 |
| 2.6 柑橘叶点霉属巢式PCR体系优化 | 第91页 |
| 2.7 果园具有疑似柑橘黑斑病症状的果实和叶片检测 | 第91-92页 |
| 3 结果与分析 | 第92-99页 |
| 3.1 特异性引物和相应的退火温度筛选 | 第92页 |
| 3.2 引物特异性检验 | 第92-94页 |
| 3.3 特异性引物灵敏度检测结果 | 第94-96页 |
| 3.4 巢式PCR体系优化 | 第96-97页 |
| 3.5 巢式多重PCR灵敏度测定结果 | 第97-98页 |
| 3.6 果园具有疑似柑橘黑斑病症状的果实和叶片检测 | 第98-99页 |
| 4 结论和讨论 | 第99-100页 |
| 第四章 中国柑橘上的叶点霉属真菌遗传多样性研究 | 第100-121页 |
| 1 前言 | 第100-102页 |
| 2 材料和方法 | 第102-106页 |
| 2.1 菌株来源 | 第102-105页 |
| 2.2 菌丝基因组DNA的提取 | 第105页 |
| 2.3 ISSR反应体系的优化 | 第105-106页 |
| 2.3.1 ISSR反应体系各成分用量研究 | 第105页 |
| 2.3.2 ISSR反应程序 | 第105页 |
| 2.3.3 引物筛选及遗传多样性分析 | 第105-106页 |
| 3 结果与分析 | 第106-119页 |
| 3.1 叶点霉属真菌菌丝基因组总DNA的质量 | 第106页 |
| 3.2 反应体系优化结果 | 第106-110页 |
| 3.2.1 Mg~(2+)对ISSR-PCR扩增结果的影响 | 第106-107页 |
| 3.2.2 dNTPs浓度对ISSR-PCR反应的影响 | 第107页 |
| 3.2.3 引物浓度对ISSR-PCR反应的影响 | 第107-108页 |
| 3.2.4 TaqDNA聚合酶用量对ISSR-PCR反应的影响 | 第108页 |
| 3.2.5 模板DNA用量对ISSR-PCR反应的影响 | 第108-110页 |
| 3.2.6 最佳柑橘叶点霉属真菌ISSR-PCR体系的建立 | 第110页 |
| 3.2.7 建立的柑橘叶点霉属真菌ISSR-PCR反应体系的稳定性检验 | 第110页 |
| 3.3 ISSR-PCR引物的筛选 | 第110-112页 |
| 3.4 ISSR图谱分析 | 第112-117页 |
| 3.5 ISSR聚类分析 | 第117-119页 |
| 4 结论与讨论 | 第119-121页 |
| 第五章 全文总结和有待研究问题 | 第121-124页 |
| 参考文献 | 第124-132页 |
