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新的可视化定量化DNA双链断裂修复检测体系的建立及在斑马鱼中应用研究

致谢第4-5页
摘要第5-6页
Abstract第6页
第一章 绪论第10-22页
    1.1 DNA损伤及DNA损伤修复第10-12页
        1.1.1 DNA损伤第10-11页
        1.1.2 DNA损伤修复第11-12页
    1.2 DNA双链断裂修复第12-15页
        1.2.1 HR途径第12-13页
        1.2.2 SSA途径第13页
        1.2.3 NHEJ途径第13-14页
        1.2.4 DNA双链断裂修复的相关研究第14-15页
    1.3 斑马鱼的简介第15-18页
        1.3.1 斑马鱼早期发育简介第15-17页
        1.3.2 模式动物斑马鱼第17-18页
    1.4 相关实验技术简第18-20页
        1.4.1 绿色荧光蛋白第18-19页
        1.4.2 吗啉代寡核苷酸第19页
        1.4.3 显微注射第19-20页
        1.4.4 聚合酶链式反应及实时荧光定量PCR第20页
    1.5 本研究的目的和意义第20-22页
第二章 实验材料与方法第22-36页
    2.1 实验材料第22-25页
        2.1.1 斑马鱼第22页
        2.1.2 试剂和仪器第22-23页
        2.1.3 设计的引物第23-25页
        2.1.4 相关MO的订购第25页
    2.2 实验方法第25-36页
        2.2.1 HR双酶切质粒的构建第25-28页
        2.2.2 SSA双酶切质粒的构建第28-29页
        2.2.3 NHEJ双酶切质粒的构建第29-30页
        2.2.4 单酶切系统的构建第30页
        2.2.5 酒精沉淀法纯化DNA第30-31页
        2.2.6 基因组DNA的提取第31页
        2.2.7 蛋白质提取第31-32页
        2.2.8 蛋白免疫印记分析第32页
        2.2.9 修复后的EGFP克隆到p-EASY载体的方法第32-33页
        2.2.10 用于测试MO效果的质粒的构建第33-34页
        2.2.11 体外转录mRNA第34-36页
第三章 实验结果第36-54页
    3.1 系统设计与构建的原理第36-38页
    3.2 三种途径的可视化和定量分析可以实现第38-42页
    3.3 NHEJ途径是斑马鱼早期发育中最主要的DNA双链断裂修复途径第42-44页
    3.4 抑制rad51表达后HR系统分析出HR途径修复减弱第44-46页
    3.5 SSA修复在敲底rad52后系统证实其显著降低第46-48页
    3.6 抑制ligaseⅣ后NHEJ途径的影响只能用体内I-sceI酶切的系统来检测第48-51页
    3.7 抑制NHEJ途径可以增强HR修复,却也抑制SSA修复第51-54页
第四章 分析与讨论第54-57页
参考文献第57-61页
附录第61-66页
作者简历第66页

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