致谢 | 第4-5页 |
摘要 | 第5-6页 |
Abstract | 第6页 |
第一章 绪论 | 第10-22页 |
1.1 DNA损伤及DNA损伤修复 | 第10-12页 |
1.1.1 DNA损伤 | 第10-11页 |
1.1.2 DNA损伤修复 | 第11-12页 |
1.2 DNA双链断裂修复 | 第12-15页 |
1.2.1 HR途径 | 第12-13页 |
1.2.2 SSA途径 | 第13页 |
1.2.3 NHEJ途径 | 第13-14页 |
1.2.4 DNA双链断裂修复的相关研究 | 第14-15页 |
1.3 斑马鱼的简介 | 第15-18页 |
1.3.1 斑马鱼早期发育简介 | 第15-17页 |
1.3.2 模式动物斑马鱼 | 第17-18页 |
1.4 相关实验技术简 | 第18-20页 |
1.4.1 绿色荧光蛋白 | 第18-19页 |
1.4.2 吗啉代寡核苷酸 | 第19页 |
1.4.3 显微注射 | 第19-20页 |
1.4.4 聚合酶链式反应及实时荧光定量PCR | 第20页 |
1.5 本研究的目的和意义 | 第20-22页 |
第二章 实验材料与方法 | 第22-36页 |
2.1 实验材料 | 第22-25页 |
2.1.1 斑马鱼 | 第22页 |
2.1.2 试剂和仪器 | 第22-23页 |
2.1.3 设计的引物 | 第23-25页 |
2.1.4 相关MO的订购 | 第25页 |
2.2 实验方法 | 第25-36页 |
2.2.1 HR双酶切质粒的构建 | 第25-28页 |
2.2.2 SSA双酶切质粒的构建 | 第28-29页 |
2.2.3 NHEJ双酶切质粒的构建 | 第29-30页 |
2.2.4 单酶切系统的构建 | 第30页 |
2.2.5 酒精沉淀法纯化DNA | 第30-31页 |
2.2.6 基因组DNA的提取 | 第31页 |
2.2.7 蛋白质提取 | 第31-32页 |
2.2.8 蛋白免疫印记分析 | 第32页 |
2.2.9 修复后的EGFP克隆到p-EASY载体的方法 | 第32-33页 |
2.2.10 用于测试MO效果的质粒的构建 | 第33-34页 |
2.2.11 体外转录mRNA | 第34-36页 |
第三章 实验结果 | 第36-54页 |
3.1 系统设计与构建的原理 | 第36-38页 |
3.2 三种途径的可视化和定量分析可以实现 | 第38-42页 |
3.3 NHEJ途径是斑马鱼早期发育中最主要的DNA双链断裂修复途径 | 第42-44页 |
3.4 抑制rad51表达后HR系统分析出HR途径修复减弱 | 第44-46页 |
3.5 SSA修复在敲底rad52后系统证实其显著降低 | 第46-48页 |
3.6 抑制ligaseⅣ后NHEJ途径的影响只能用体内I-sceI酶切的系统来检测 | 第48-51页 |
3.7 抑制NHEJ途径可以增强HR修复,却也抑制SSA修复 | 第51-54页 |
第四章 分析与讨论 | 第54-57页 |
参考文献 | 第57-61页 |
附录 | 第61-66页 |
作者简历 | 第66页 |