| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 1 绪论 | 第12-21页 |
| 1.1 毛尖紫萼藓简介 | 第12页 |
| 1.2 植物对干旱胁迫的反应 | 第12-16页 |
| 1.2.1 植物抗旱的形态学机制 | 第13-14页 |
| 1.2.2 植物耐旱的生理、生化作用机制 | 第14-16页 |
| 1.3 谷胱氨肽-S-转移酶的相关研究 | 第16-17页 |
| 1.4 苔藓植物的研究现状 | 第17-20页 |
| 1.4.1 苔藓植物在国内的研究概况 | 第17-18页 |
| 1.4.2 苔藓植物国外研究进展 | 第18-20页 |
| 1.5 课题研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 2 毛尖紫萼藓 GST 基因 GH394 的 3′-RACE 克隆及生物信息学分析 | 第21-51页 |
| 2.1 实验材料、药品及仪器 | 第21-24页 |
| 2.1.1 植物材料、实验菌株与克隆载体 | 第21页 |
| 2.1.2 实验所用试剂及药品配制 | 第21-23页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.1.4 分析软件及网站 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-30页 |
| 2.2.1 总 RNA 的提取 | 第24页 |
| 2.2.2 总 RNA 的纯化 | 第24-25页 |
| 2.2.3 cDNA 第一链的合成 | 第25-26页 |
| 2.2.4 3′-RACE 引物设计 | 第26页 |
| 2.2.5 3′-RACE 反应 | 第26-27页 |
| 2.2.6 3′-RACE 的 PCR 扩增产物胶回收 | 第27页 |
| 2.2.7 连接转化 | 第27-29页 |
| 2.2.8 重组质粒的提取 | 第29-30页 |
| 2.2.9 测序 | 第30页 |
| 2.3 生物信息学分析 | 第30-31页 |
| 2.3.1 ORF 的查找分析 | 第30页 |
| 2.3.2 蛋白理化性质分析 | 第30页 |
| 2.3.3 氨基酸二级结构的预测 | 第30页 |
| 2.3.4 氨基酸三维结构预测 | 第30页 |
| 2.3.5 基因家族预测 | 第30页 |
| 2.3.6 GH394 基因的保守区、功能位点及疏水性分析 | 第30页 |
| 2.3.7 GH394 基因蛋白跨膜区域及亚细胞定位分析 | 第30-31页 |
| 2.3.8 序列同源性和相似性搜索 | 第31页 |
| 2.3.9 多序列比对和系统进化树的建立 | 第31页 |
| 2.4 结果与分析 | 第31-49页 |
| 2.4.1 总 RNA 的提取与检测 | 第31-32页 |
| 2.4.2 反转录合成 cDNA 结果检测 | 第32-33页 |
| 2.4.3 3′-RACE 结果 | 第33-34页 |
| 2.4.4 GH394 基因的生物信息学分析 | 第34-49页 |
| 2.5 讨论 | 第49-51页 |
| 3 pMD-GH394 克隆载体构建 | 第51-61页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第51页 |
| 3.1.1 主要试剂及载体 | 第51页 |
| 3.1.2 试验材料 | 第51页 |
| 3.2 实验方法 | 第51-54页 |
| 3.2.1 酶切位点的选择 | 第51页 |
| 3.2.2 谷胱甘肽-S-转移酶基因 GH394 的获得 | 第51-52页 |
| 3.2.3 PCR 扩增反应 | 第52页 |
| 3.2.4 目的条带与 T 载体的连接 | 第52页 |
| 3.2.5 E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第52页 |
| 3.2.6 连接产物转化及阳性菌株的筛选 | 第52-53页 |
| 3.2.7 测序 | 第53页 |
| 3.2.8 pMD18T-GH394 重组质粒的提取与双酶切 | 第53页 |
| 3.2.9 阳性克隆菌种的保藏 | 第53-54页 |
| 3.3 结果与分析 | 第54-59页 |
| 3.3.1 酶切位点的分析 | 第54-55页 |
| 3.3.2 PCR 扩增反应 | 第55-56页 |
| 3.3.3 pMD18T-GH394 连接产物的转化 | 第56页 |
| 3.3.4 阳性转化菌株的筛选 | 第56-57页 |
| 3.3.5 测序结果的分析 | 第57-58页 |
| 3.3.6 pMD18T-GH394 重组质粒的双酶切 | 第58-59页 |
| 3.4 讨论 | 第59-61页 |
| 4 pRI 101-AN-GH394 表达载体的构建 | 第61-68页 |
| 4.1 材料 | 第61页 |
| 4.1.1 质粒载体及菌株 | 第61页 |
| 4.1.2 酶及试剂 | 第61页 |
| 4.2 实验方法 | 第61-64页 |
| 4.2.1 pRI 101-AN DNA 载体的双酶切 | 第61页 |
| 4.2.2 目的片段与载体片段的连接 | 第61-62页 |
| 4.2.3 pRI 101-AN- GH394 载体质粒的修复转化及阳性菌株的筛选 | 第62页 |
| 4.2.4 pRI 101-AN- GH394 表达载体质粒的提取 | 第62-63页 |
| 4.2.5 根癌农杆菌 GV3101 感受态细胞的制备 | 第63页 |
| 4.2.6 pRI 101-AN- GH394 表达载体工程菌的制备 | 第63-64页 |
| 4.2.7 阳性检测 | 第64页 |
| 4.3 结果与分析 | 第64-66页 |
| 4.3.1 (pRI 101-AN- GH394)及 GV3101(pRI 101-AN- GH394)的获得 | 第64-66页 |
| 4.4 讨论 | 第66-68页 |
| 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
