| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 缩略语表 | 第14-16页 |
| 前言 | 第16-18页 |
| 第一章 材料与方法 | 第18-36页 |
| 1.1 试剂和耗材 | 第18-21页 |
| 1.1.1 主要试剂 | 第18-20页 |
| 1.1.2 主要耗材 | 第20-21页 |
| 1.2 主要仪器 | 第21-22页 |
| 1.3 主要试剂的配制 | 第22-24页 |
| 1.4 实验方法 | 第24-35页 |
| 1.4.1 细胞培养 | 第24-25页 |
| 1.4.2 组织芯片的免疫组化 | 第25-26页 |
| 1.4.3 线粒体与胞浆蛋白提取及免疫印迹检测蛋白水平 | 第26-27页 |
| 1.4.4 酵母双杂交 | 第27-28页 |
| 1.4.5 分子克隆与PCR | 第28-32页 |
| 1.4.6 细胞免疫荧光 | 第32-33页 |
| 1.4.7 小干扰RNA的构建和转染 | 第33页 |
| 1.4.8 免疫共沉淀 | 第33-34页 |
| 1.4.9 线粒体电子呼吸链复合物Ⅰ活性检测 | 第34-35页 |
| 1.4.10 细胞活力测定 | 第35页 |
| 1.5 统计学分析 | 第35-36页 |
| 第二章 结果 | 第36-46页 |
| 2.1 CD147在原位和转移性恶性黑素瘤组织中的表达 | 第36页 |
| 2.2 CD147在A375细胞线粒体中的表达 | 第36-37页 |
| 2.2.1 A375细胞线粒体蛋白和胞浆蛋白中CD147的表达 | 第36-37页 |
| 2.2.2 CD147与ATP5B在A375细胞线粒体上共定位 | 第37页 |
| 2.3 CD147在线粒体上的可能结合蛋白的筛选与鉴定 | 第37-39页 |
| 2.3.1 筛选CD147的可能结合蛋白 | 第37-38页 |
| 2.3.2 在HEK293T细胞中过表达CD147和NDUFS6 | 第38页 |
| 2.3.3 免疫共沉淀验证CD147与NDUFS6的特异性结合 | 第38-39页 |
| 2.3.4 细胞免疫荧光验证CD147与NDUFS6的共定位 | 第39页 |
| 2.4 明确CD147与NDUFS6的结合区段 | 第39-41页 |
| 2.4.1 将敲除了不同结构区域的CD147-Myc质粒在HEK293T细胞中与Flag-NDUFS6质粒共转,免疫共沉淀找出结合区段 | 第39-40页 |
| 2.4.2 细胞免疫荧光进一步验证CD147与NDUFS6的结合区段 | 第40-41页 |
| 2.5 CD147SIRNA对线粒体电子呼吸链复合物Ⅰ活性的影响 | 第41-43页 |
| 2.5.1 线粒体复合物Ⅰ活性标准曲线的制作 | 第41-42页 |
| 2.5.2 A375细胞中用siRNA干扰CD147的表达 | 第42页 |
| 2.5.3 CD147 siRNA对A375细胞线粒体复合物Ⅰ活性的影响 | 第42-43页 |
| 2.6 CD147sIRNA对黄连素处理的A375细胞活力的影响 | 第43-44页 |
| 2.7 CD147sIRNA对黄连素引起的A375细胞线粒体凋亡途径的影响 | 第44-46页 |
| 2.7.1 CD147siRNA增加了黄连素引起的A375细胞凋亡 | 第44-45页 |
| 2.7.2 CD147siRNA通过线粒体途径增加了黄连素引起的A375细胞凋亡 | 第45-46页 |
| 第三章 讨论 | 第46-49页 |
| 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 综述 | 第56-68页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 攻读学位期间主要研究成果 | 第69页 |
