| 英文缩略词表 | 第8-10页 |
| 中文摘要 | 第10-14页 |
| 英文摘要 | 第14-18页 |
| 1 前言 | 第19-22页 |
| 2 实验材料 | 第22-27页 |
| 2.1 实验动物 | 第22页 |
| 2.2 细胞系 | 第22页 |
| 2.3 试剂 | 第22-25页 |
| 2.3.1 主要药品 | 第22-23页 |
| 2.3.2 常用试剂 | 第23页 |
| 2.3.3 培养细胞试剂 | 第23页 |
| 2.3.4 ELISA试剂 | 第23页 |
| 2.3.5 免疫组化试剂 | 第23-24页 |
| 2.3.6 PCR和real-time PCR试剂 | 第24页 |
| 2.3.7 Western blot试剂 | 第24-25页 |
| 2.4 主要仪器 | 第25-27页 |
| 2.4.1 常用仪器 | 第25-26页 |
| 2.4.2 免疫组化仪器 | 第26页 |
| 2.4.3 摄像仪器 | 第26-27页 |
| 2.5 主要溶液配制 | 第27页 |
| 3 实验方法 | 第27-43页 |
| 3.1 佐剂性关节炎大鼠模型的建立及鉴定 | 第27-28页 |
| 3.2 标本的采集 | 第28页 |
| 3.2.1 大鼠膝关节组织的采集 | 第28页 |
| 3.2.2 血清样本的采集 | 第28页 |
| 3.3 腹腔巨噬细胞的提取 | 第28页 |
| 3.4 HE染色及摄片 | 第28-30页 |
| 3.5 免疫组织化学及摄片 | 第30-31页 |
| 3.6 免疫荧光检测 | 第31页 |
| 3.7 ELISA法检测血清中IL-22、IL-33、IL-18和IL-1β含量 | 第31-33页 |
| 3.7.1 ELISA实验检测原理 | 第31-32页 |
| 3.7.2 ELISA实验操作步骤 | 第32页 |
| 3.7.3 ELISA实验操作注意事项 | 第32页 |
| 3.7.4 ELISA实验结果分析 | 第32-33页 |
| 3.8 lipofetaminTM 2000试剂瞬时转染miR-223 mimics(模拟物)进入细胞 | 第33-34页 |
| 3.9 RT-PCR法和real-time PCR | 第34-38页 |
| 3.9.1 总RNA的提取 | 第34页 |
| 3.9.2 第一链cDNA的合成 | 第34-35页 |
| 3.9.3 PCR扩增 | 第35-36页 |
| 3.9.4 PCR产物的检测 | 第36-38页 |
| 3.10 Western-blot检测技术 | 第38-41页 |
| 3.10.1 SDS-PAGE实验原理 | 第38-39页 |
| 3.10.2 细胞总蛋白的提取 | 第39页 |
| 3.10.3 SDS-PAGE操作步骤 | 第39-40页 |
| 3.10.4 电转移 | 第40-41页 |
| 3.10.5 抗原抗体反应及显色 | 第41页 |
| 3.10.6 结果分析 | 第41页 |
| 3.11 统计学分析 | 第41-43页 |
| 4 结果 | 第43-65页 |
| 4.1 AA大鼠模型的建立以及炎症因子检测 | 第43-47页 |
| 4.1.1 AA大鼠体重差额的变化 | 第43页 |
| 4.1.2 AA大鼠继发性关节肿胀度的检测 | 第43-44页 |
| 4.1.3 AA大鼠的膝关节组织HE染色观察结果 | 第44-45页 |
| 4.1.4 AA大鼠中IL-1β、IL-18、IL-22及IL-33的表达 | 第45-47页 |
| 4.1.4.1 AA大鼠血清中IL-1β、IL-18、IL-22及IL-33的表达 | 第45-46页 |
| 4.1.4.2 CD68染色鉴定AA大鼠腹腔巨噬细胞 | 第46-47页 |
| 4.1.4.3 检测AA大鼠腹腔巨噬细胞上清液中细胞因子表达 | 第47页 |
| 4.2 NLRP3炎症小体与miR-223在AA大鼠中的表达 | 第47-49页 |
| 4.2.1 免疫组织化学检测AA大鼠滑膜组织中Nlrp3、ASC、caspase-1的表达 | 第47-48页 |
| 4.2.2 AA大鼠腹腔巨噬细胞Nlrp3、ASC、caspase-1、miR-223 mRNA和蛋白的表达情况 | 第48-49页 |
| 4.3 巨噬细胞的筛选与在RAW264.7细胞株上NLRP3炎症小体调控炎症因子分泌 | 第49-57页 |
| 4.3.1 腹腔巨噬细胞、RAW264.7、THP-1细胞的筛选 | 第49-52页 |
| 4.3.1.1 LPS诱导腹腔巨噬细胞、RAW264.7、THP-1细胞对上清液中IL-1β和IL-18的影响 | 第49-50页 |
| 4.3.1.2 LPS诱导腹腔巨噬细胞、RAW264.7、THP-1细胞对miR-223mRNA的影响 | 第50-51页 |
| 4.3.1.3 LPS诱导腹腔巨噬细胞、RAW264.7、THP-1细胞对Nlrp3的影响 | 第51-52页 |
| 4.3.2 在RAW264.7细胞株上NLRP3炎症小体调控炎症因子分泌 | 第52-57页 |
| 4.3.2.1 LPS、ATP、K+对RAW264.7细胞分泌炎症因子的影响 | 第52-53页 |
| 4.3.2.2 LPS、ATP、K+对RAW264.7细胞中Nlrp3、ASC、Caspase-1蛋白表达的影响 | 第53-55页 |
| 4.3.2.3 LPS、ATP对NLRP3-/-的RAW264.7细胞分泌炎症因子的影响 | 第55-56页 |
| 4.3.2.4 LPS、ATP对NLRP3-/-的RAW264.7细胞中Nlrp3、ASC、Caspase-1蛋白和mRNA表达的影响 | 第56-57页 |
| 4.4 miR-223对NLRP3的调控作用 | 第57-65页 |
| 4.4.1 鉴定miR-223与Nlrp3的靶向关系 | 第57-58页 |
| 4.4.2 miR-223对RAW264.7细胞的Nlrp3、IL-1β和IL-18的调控作用 | 第58-65页 |
| 4.4.2.1 过表达miR-223对RAW264.7细胞的Nlrp3、IL-1β和IL-18的调控作用 | 第58-60页 |
| 4.4.2.2 低表达miR-223对RAW264.7细胞的Nlrp3、IL-1β和IL-18的调控作用 | 第60-62页 |
| 4.4.2.3 同时过表达mR-223和沉默Nlrp3对IL-1β和IL-1β的调控作用 | 第62-65页 |
| 5 讨论 | 第65-74页 |
| 1) AA大鼠模型的建立以及炎症因子检测 | 第65-66页 |
| 2) NLRP3炎症小体与miR-223在AA大鼠中的表达 | 第66-67页 |
| 3) 巨噬细胞的筛选与NLRP3炎症小体在RAW264.7细胞株上调控炎症因子分泌 | 第67-71页 |
| 4) miR-223对NLRP3的调控作用 | 第71-74页 |
| 6 结论 | 第74页 |
| 参考文献 | 第74-80页 |
| 附录 | 第80-82页 |
| 致谢 | 第82-84页 |
| 综述 NLRP3炎症小体与类风湿性关节炎 | 第84-96页 |
| 参考文献 | 第91-96页 |
