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KGH-R1-ScFv单链抗体与p21Ras蛋白免疫反应性研究

摘要第5-7页
Abstract第7-8页
第一章 前言第13-20页
    1.1 癌症发生率及死亡率第13-14页
    1.2 ras基因与癌症第14-17页
    1.3 以ras为靶点治疗肿瘤第17-18页
    1.4 课题前期工作第18-19页
    1.5 本课题研究意义第19-20页
第二章 实验材料第20-25页
    2.1 实验菌株、质粒及细胞株第20页
    2.2 实验仪器第20-22页
    2.3 主要试剂及耗材第22-24页
    技术路线第24-25页
第三章 实验方法第25-55页
    3.1 重组质粒构建第25-35页
        3.1.1 全基因合成突变ras基因序列及KGH-R1-ScFv基因序列第25-29页
        3.1.2 细菌培养及质粒提取第29-30页
        3.1.3 BamH Ⅰ与Hind Ⅲ双酶切获得目的片段与载体第30-32页
        3.1.4 T4 DNA Ligase连接目的片段与载体并转化大肠杆菌感受态第32-33页
        3.1.5 菌落PCR和双酶切鉴定第33-35页
    3.2 重组蛋白的获取第35-41页
        3.2.1 菌液过夜扩增培养并提取菌液内重组质粒第35页
        3.2.2 重组质粒转化到BL21大肠杆菌感受态内第35页
        3.2.3 诱导BL21大肠杆菌感受态表达重组蛋白第35-36页
        3.2.4 重组蛋白纯化及复性第36-39页
        3.2.5 SDS-PAGE鉴定重组蛋白第39-41页
    3.3 酶联免疫吸附法检测单链抗体与p21Ras蛋白免疫反应性第41-44页
    3.4 肿瘤细胞培养及细胞爬片制作第44-48页
    3.5 细胞免疫荧光实验第48-50页
    3.6 蛋白印迹实验第50-55页
第四章 结果第55-64页
    4.1 菌落PCR及双酶切鉴定第55-56页
    4.2 蛋白纯化及复性结果第56-57页
    4.3 SDS-PAGE电泳第57-58页
    4.4 酶联免疫法(ELISA)结果第58-62页
    4.5 细胞免疫荧光实验第62-63页
    4.6 Westen Blotting结果第63-64页
第五章 讨论第64-69页
    5.1 原核中表达重组蛋白第64-65页
    5.2 KGH-R1-ScFv单链抗体与p21Ras蛋白的免疫反应谱第65-67页
    5.3 本课题的不足第67-69页
第六章 结论第69-70页
第七章 展望第70-71页
致谢第71-72页
参考文献第72-78页
附录A 攻读学位期间发表论文目录第78页

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