| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 前言 | 第13-20页 |
| 1.1 癌症发生率及死亡率 | 第13-14页 |
| 1.2 ras基因与癌症 | 第14-17页 |
| 1.3 以ras为靶点治疗肿瘤 | 第17-18页 |
| 1.4 课题前期工作 | 第18-19页 |
| 1.5 本课题研究意义 | 第19-20页 |
| 第二章 实验材料 | 第20-25页 |
| 2.1 实验菌株、质粒及细胞株 | 第20页 |
| 2.2 实验仪器 | 第20-22页 |
| 2.3 主要试剂及耗材 | 第22-24页 |
| 技术路线 | 第24-25页 |
| 第三章 实验方法 | 第25-55页 |
| 3.1 重组质粒构建 | 第25-35页 |
| 3.1.1 全基因合成突变ras基因序列及KGH-R1-ScFv基因序列 | 第25-29页 |
| 3.1.2 细菌培养及质粒提取 | 第29-30页 |
| 3.1.3 BamH Ⅰ与Hind Ⅲ双酶切获得目的片段与载体 | 第30-32页 |
| 3.1.4 T4 DNA Ligase连接目的片段与载体并转化大肠杆菌感受态 | 第32-33页 |
| 3.1.5 菌落PCR和双酶切鉴定 | 第33-35页 |
| 3.2 重组蛋白的获取 | 第35-41页 |
| 3.2.1 菌液过夜扩增培养并提取菌液内重组质粒 | 第35页 |
| 3.2.2 重组质粒转化到BL21大肠杆菌感受态内 | 第35页 |
| 3.2.3 诱导BL21大肠杆菌感受态表达重组蛋白 | 第35-36页 |
| 3.2.4 重组蛋白纯化及复性 | 第36-39页 |
| 3.2.5 SDS-PAGE鉴定重组蛋白 | 第39-41页 |
| 3.3 酶联免疫吸附法检测单链抗体与p21Ras蛋白免疫反应性 | 第41-44页 |
| 3.4 肿瘤细胞培养及细胞爬片制作 | 第44-48页 |
| 3.5 细胞免疫荧光实验 | 第48-50页 |
| 3.6 蛋白印迹实验 | 第50-55页 |
| 第四章 结果 | 第55-64页 |
| 4.1 菌落PCR及双酶切鉴定 | 第55-56页 |
| 4.2 蛋白纯化及复性结果 | 第56-57页 |
| 4.3 SDS-PAGE电泳 | 第57-58页 |
| 4.4 酶联免疫法(ELISA)结果 | 第58-62页 |
| 4.5 细胞免疫荧光实验 | 第62-63页 |
| 4.6 Westen Blotting结果 | 第63-64页 |
| 第五章 讨论 | 第64-69页 |
| 5.1 原核中表达重组蛋白 | 第64-65页 |
| 5.2 KGH-R1-ScFv单链抗体与p21Ras蛋白的免疫反应谱 | 第65-67页 |
| 5.3 本课题的不足 | 第67-69页 |
| 第六章 结论 | 第69-70页 |
| 第七章 展望 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 附录A 攻读学位期间发表论文目录 | 第78页 |
