| 缩略词表 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 前言 | 第12-14页 |
| 第一部分 产气荚膜梭菌epsilon毒素减毒突变体的构建及减毒机制的研究 | 第14-35页 |
| 1 材料与方法 | 第15-21页 |
| 1.1 材料和试剂 | 第15页 |
| 1.2 主要仪器 | 第15页 |
| 1.3 细菌的培养，质粒的提取 | 第15页 |
| 1.4 突变引物的设计 | 第15-16页 |
| 1.5 突变基因引入载体 | 第16-17页 |
| 1.6 突变质粒的转化、鉴定 | 第17-18页 |
| 1.7 突变体蛋白的表达、纯化 | 第18页 |
| 1.8 各突变体蛋白的浓缩、定量 | 第18-19页 |
| 1.9 突变体蛋白的动物毒力实验 | 第19页 |
| 1.10 减毒突变体蛋白的免疫实验 | 第19页 |
| 1.11 突变体蛋白的细胞毒性实验 | 第19页 |
| 1.12 突变体蛋白的七聚体形成实验 | 第19页 |
| 1.13 突变体蛋白和MDCK细胞的结合能力实验 | 第19-20页 |
| 1.14 减毒突变体蛋白的成孔能力实验 | 第20页 |
| 1.15 圆二色谱实验 | 第20-21页 |
| 2 结果 | 第21-33页 |
| 2.1 PCR鉴定结果 | 第21-22页 |
| 2.2 定点突变后基因测序结果比对 | 第22-23页 |
| 2.3 蛋白表达与纯化 | 第23-27页 |
| 2.4 蛋白定量 | 第27-28页 |
| 2.5 突变体蛋白的动物毒性实验 | 第28页 |
| 2.6 四种突变体蛋白的western-blot实验 | 第28-29页 |
| 2.7 减毒重组蛋白的细胞毒性实验 | 第29页 |
| 2.8 四种减毒重组蛋白的七聚体形成实验 | 第29-30页 |
| 2.9 减毒重组蛋白的细胞结合实验 | 第30-31页 |
| 2.10 重组蛋白的成孔能力比较 | 第31-32页 |
| 2.11 圆二色谱实验 | 第32-33页 |
| 3 讨论 | 第33-35页 |
| 第二部分 重组减毒突变体蛋白rETX~(Y196E)-C的小鼠免疫效果评价 | 第35-48页 |
| 1 材料与方法 | 第36-40页 |
| 1.1 材料 | 第36页 |
| 1.2 突变体蛋白rETX~(Y196E)-C热稳定性实验 | 第36-37页 |
| 1.3 小鼠的领取和培养 | 第37页 |
| 1.4 减毒蛋白和佐剂混合及动物免疫 | 第37页 |
| 1.5 免疫后小鼠的攻毒实验 | 第37页 |
| 1.6 小鼠血清的抗体效价测定及抗原抗体的亲和力测定 | 第37-38页 |
| 1.7 免疫后小鼠血清的体外中和实验 | 第38页 |
| 1.8 病理损伤实验 | 第38页 |
| 1.9 免疫小鼠体内的细胞因子检测 | 第38-40页 |
| 2 结果 | 第40-46页 |
| 2.1 蛋白的热稳定性实验 | 第40页 |
| 2.2 免疫过程中小鼠体重变化 | 第40-41页 |
| 2.3 免疫后小鼠的攻毒实验 | 第41-42页 |
| 2.4 免疫后小鼠血清的抗体效价 | 第42-43页 |
| 2.5 抗原抗体亲和力实验 | 第43页 |
| 2.6 体外中和实验 | 第43-44页 |
| 2.7 病理损伤实验 | 第44-45页 |
| 2.8 流式细胞实验 | 第45-46页 |
| 3 讨论 | 第46-48页 |
| 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-52页 |
| 附录 | 第52-54页 |
| 个人简历 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
